實驗性房顫兔心房不同部位自主神經(jīng)重構的差異性研究及他汀干預的影響.pdf

1、心房顫動（簡稱房顫，atrial fibrillation，AF）是由于心房無序的顫動造成的嚴重的心房電活動紊亂，是目前臨床工作中最常見的心律失常之一。房顫使得心房失去了有效的收縮與舒張，加之房室結對快速心房激動的遞減傳導引起的紊亂的心室率導致患者常出現(xiàn)胸悶、心悸等臨床癥狀。房顫患者的主要病理生理特點為心室律（率）紊亂、心功能受損和心房附壁血栓形成，而栓塞、心力衰竭等并發(fā)癥導致房顫患者的致殘率和致死率大大增加，醫(yī)療花費也大大增加。迄今為

2、止，房顫治療效果依然不盡人意。藥物治療是房顫治療的基石，射頻消融術近年來隨著其技術水平的提高，消融成功率也逐漸增高。然而，房顫治療的長期有效性卻由于傳統(tǒng)抗心律失常藥物的潛在副作用和射頻消融術的高復發(fā)率特別是長期復發(fā)率偏高而備受限制，這與房顫發(fā)生的確切機制尚未完全闡明密切相關，也大大增加了房顫治療的難度。房顫的發(fā)生機制十分復雜，房顫可導致心房電學和組織學特性發(fā)生改變，形成心房重構，包括早期的電重構和較晚期的結構重構，兩者隨著房顫進程而進展

3、，互相影響又相互促進。近年研究表明，心臟自主神經(jīng)系統(tǒng)(autonomic nervous system，ANS)是房顫的發(fā)生與維持中的重要環(huán)節(jié)，ANS包括外在ANS與內(nèi)在ANS。越來越多的研究顯示，心臟內(nèi)在ANS的神經(jīng)元及其神經(jīng)纖維的過度再生及不均一分布即心臟內(nèi)在自主神經(jīng)重構(autonomic neuralremodeling，ANR)，參與了房顫的發(fā)生與維持，是房顫的重要發(fā)病機制。而且神經(jīng)重構常常與電重構及結構重構并存，彼此相互促進

4、，形成惡性循環(huán)，導致AF的發(fā)生并持續(xù)下去。
　　房顫發(fā)生后，心房的自主神經(jīng)重構隨即產(chǎn)生。研究表明，包括交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)重構在內(nèi)的自主神經(jīng)重構在房顫維持和易損基質的形成過程中起著重要作用。而對于房顫發(fā)生后心房自主神經(jīng)重構的部位而言，目前關于房顫后心房神經(jīng)重構的研究大多集中在左右心房的神經(jīng)重構，而很少涉及房間隔。由于房間隔的兩側而為心內(nèi)膜，中間又夾有結締組織及肌束，其中位于房間隔下部右心房面的卵圓窩處主要由結締組織構成，因此房間隔

5、是極度不均一的特殊組織結構，其在房顫的發(fā)生中是否發(fā)生了神經(jīng)重構，其與心房其他部位的神經(jīng)重構程度是否存在差異性以及其在房顫發(fā)生中所起的作用尚不明確。
　　他汀類藥物作為目前廣泛應用的調脂藥物，具有抗炎、改善內(nèi)皮功能、減輕心肌缺血再灌注損傷等多種不同作用，而近期他汀類藥物對心律失常的防治作用已成為研究的熱點，特別是其對房顫等房性心律失常的防治作用受到廣泛關注，近期研究結果表明他汀類藥物對心臟外科圍手術期房顫具有顯著的預防作用，但其作用

6、機制仍不明確。他汀類藥物是否能夠改善或者逆轉房顫的自主神經(jīng)重構，這種改善或逆轉的程度是否存在心房不同部位的差異性，以及其對房顫發(fā)生的抑制作用如何，目前尚無報道。據(jù)此，本研究應用心房快速起搏兔制作房顫模型，觀察房顫兔模型心房各部位自主神經(jīng)重構的特點及有無差異性，同時應用瑞舒伐他汀進行藥物干預，觀察他汀類藥物對于房顫兔模型中心房各不同部位的自主神經(jīng)重構的影響，并探討其在房顫中的作用機制及療效，為房顫治療提供新的干預靶點，也為臨床上他汀類藥物

7、防治房顫提供新的依據(jù)。
　　目的：
　　本研究應用心房快速起搏兔制作房顫模型，觀察房顫兔模型心房各部位自主神經(jīng)重構、心房不同部位的自主神經(jīng)重構有無差異性與房顫誘發(fā)率的變化以及瑞舒伐他汀鈣對心房各部位自主神經(jīng)重構的影響，試圖探討瑞舒伐他汀鈣對房顫治療的可能機制，為房顫治療提供新的干預靶點。
　　方法：
　　1.房顫兔模型的制作及實驗分組
　　1.1 實驗分組
　　將健康新西蘭大白兔30只隨機分為對照組(

8、C，n=10)、快速起搏組(P，n=10)、瑞舒伐他汀鈣干預組(R，n=10)共三組。
　　(1)對照組（C組）植入起搏器但不打開起搏器開關，喂養(yǎng)2周。
　　(2)快速起搏組（P組）植入動物起搏器以600次/分快速起搏2周。
　　(3)瑞舒伐他汀鈣干預組（R組）以同樣的方法起搏兩周，同時術后給予瑞舒伐他汀鈣(5mg/kg/d)灌胃2周，其余兩組以安慰劑生理鹽水灌胃2周。
　　1.2 房顫兔模型制作
　　利用

9、快速右心房起搏的方法制備房顫兔的動物模型。新西蘭大白兔以3％戊巴比妥鈉(30mg/kg)耳緣靜脈麻醉后，頸部切開皮膚找到頸靜脈，從頸靜脈植入動物起搏器，起搏器電極經(jīng)心內(nèi)電生理儀標測至高位右房，在X線透視下固定電極，然后分離頸部皮膚制作囊袋，將起搏器放入囊袋中，慶大霉素沖洗囊袋，縫合皮膚，整個過程遵循無菌操作，術后青霉素抗感染3天。
　　2.術前、術后心內(nèi)電生理指標的測定
　　術前經(jīng)頸靜脈植入標測電極，連接電生理儀，以S1Sl

10、200ms，S1S2起始周長150ms，步長為-5ms，電壓4V，測定心房的有效不應期(AERP)并以S1S1刺激觀察房顫誘發(fā)率，術后2周再次測定AERP和房顫誘發(fā)率。術中應用多導電生理儀LEAD-7000持續(xù)進行標準Ⅱ導聯(lián)心電監(jiān)測和血壓監(jiān)測。
　　3.心電圖檢測
　　術前所有動物均應用心臟電生理儀檢測心電圖，術后每天進行體表心電圖檢查以確定有無房顫發(fā)生（檢查時關閉起搏器開關），房顫發(fā)生以心電圖出現(xiàn)至少持續(xù)30s以上的頻率快

11、、形態(tài)多變不規(guī)則的房顫波形為標準。
　　4.免疫印記(Western-blot)測定
　　由于膽堿乙酰轉移酶（choline acetyl transferase，CHAT）代表心臟中膽堿能神經(jīng)的分布及其活性;絡氨酸羥化酶(TH)陽性可代表心臟中交感神經(jīng)的分布情況。2周后取左右心房及房間隔組織并以酪氨酸羥化酶(TH)及乙酰膽堿轉移酶(CHAT)分別標記交感與副交感神經(jīng)，應用Western-bot檢測各組心肌組織標本中CHAT

12、、TH蛋白表達情況，即獲得心臟中膽堿能神經(jīng)和交感神經(jīng)的含量，從而明確各組動物心臟自主神經(jīng)分布及含量。
　　5.免疫組化測定
　　通過免疫組化方法和Western-blotting對CHAT、TH陽性神經(jīng)進行染色。測定交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)形態(tài)、密度及分布，并使用計算機輔助形態(tài)計量分析系統(tǒng)(Image-Pro Plus6.0)在高倍鏡下進行神經(jīng)密度分析和測量。
　　統(tǒng)計學分析:應用SPSS17.0軟件對所有數(shù)據(jù)資料進行統(tǒng)計

13、學分析，計量資料以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用LSD檢驗，多組間多部位比較采用重復測量設計的方差分析，各組間房顫誘發(fā)率的比較采用卡方檢驗，檢驗水準α=0.05，P值為雙側，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.心內(nèi)電生理指標的測定結果
　　起搏兩周后，與C組比較，P組AERP縮短，且P組的房顫房顫誘發(fā)率顯著增加(P＜0.05)，而R組AERP與房顫誘發(fā)率較C組比較無明顯差異(P

14、＞0.05)，但較P組AERP延長，房顫誘發(fā)率下降(P＜0.05)。
　　2.心電圖檢測結果
　　應用多導電生理儀進行房顫誘發(fā)率檢測及每日復查體表心電圖發(fā)現(xiàn)，C組無自發(fā)性房顫或其他房性心律失常發(fā)生，P組所有接受右心房快速起搏兔中共有8只出現(xiàn)房顫，成功建立房顫模型。而R組經(jīng)過2周瑞舒伐他汀鈣干預后，僅1只兔子發(fā)生房顫(P＜0.01)。
　　3.免疫印記(Western-blot)測定結果
　　蛋白質印跡法(West

15、ern blotting)顯示，與C組相比，P組左右心房和房間隔的TH和CHAT蛋白表達量均明顯增加(P＜0.05)，在起搏兩周后P組左房、房間隔和右心房的TH和CHAT蛋白表達量均較C組升高2-4倍(P＜0.05)。而R組經(jīng)過兩周的瑞舒伐他汀鈣藥物干預后，左房、房間隔和右房的交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)的蛋白表達量雖仍高于C組，但較P組明顯下降(P＜0.05)。
　　4.免疫組化測定結果
　　免疫組化染色顯示C組左心房、房間隔和右

16、心房組織中TH與CHAT陽性的神經(jīng)纖維密度無明顯差異，但房間隔神經(jīng)分布的不均一程度最大(P＜0.05);P組中左右心房和房間隔的TH與CHAT陽性神經(jīng)纖維密度均顯著高于C組，神經(jīng)分布不均一程度顯著增加(P＜0.05)，其中右心房＞房間隔＞左心房;而R組中TH和CHAT陽性神經(jīng)纖維密度雖仍高于C組，但與P組相比則明顯下降，神經(jīng)分布不均一程度也降低(P＜0.05)，其中右心房和房間隔的神經(jīng)密度下降更明顯，大于左心房(P＜0.05)。