阿托伐他汀對(duì)快速心房起搏兔房顫模型心房重構(gòu)影響的研究.pdf

1、心房顫動(dòng)（簡(jiǎn)稱房顫）是臨床上最常見的心律失常。它可以引起心力衰竭、腦卒中等多種并發(fā)癥，導(dǎo)致死亡率增加，嚴(yán)重影響著患者的壽命和生活質(zhì)量，增加醫(yī)療支出和社會(huì)負(fù)擔(dān)。目前，房顫的治療方法可以分為“節(jié)律控制”和“室率控制”。“節(jié)律控制”是指通過藥物復(fù)律、電復(fù)律或射頻消融手術(shù)，轉(zhuǎn)復(fù)并維持竇性心律；“室率控制”則是指通過藥物控制患者靜息及運(yùn)動(dòng)時(shí)的心室率，減少房顫癥狀，同時(shí)給予抗凝治療，預(yù)防血栓栓塞并發(fā)癥。近年來(lái)，雖然房顫的藥物和射頻消融治療取得了極大

2、的進(jìn)展，但是針對(duì)藥物復(fù)律、電復(fù)律或房顫射頻消融術(shù)后如何進(jìn)行后續(xù)治療預(yù)防房顫復(fù)發(fā)，如何更有效抗凝預(yù)防房顫相關(guān)并發(fā)癥等問題，目前仍缺乏有效解決措施。因此，深入了解房顫的發(fā)病機(jī)制，從而探索房顫治療的新方法，仍是臨床亟待解決的問題。
　　房顫發(fā)生和維持的主要病理生理機(jī)制是心房重構(gòu)，包括電重構(gòu)和結(jié)構(gòu)重構(gòu)。電重構(gòu)是指由于心房離子通道功能異常，引起心房有效不應(yīng)期縮短、心房有效不應(yīng)期的頻率適應(yīng)性降低、傳導(dǎo)不均一性增高等；結(jié)構(gòu)重構(gòu)主要表現(xiàn)為心房擴(kuò)張

3、和間質(zhì)纖維化。越來(lái)越多的研究表明，炎癥和氧化應(yīng)激在房顫中發(fā)揮重要作用。一方面，炎癥促進(jìn)心房的電重構(gòu)和結(jié)構(gòu)重構(gòu)，從而導(dǎo)致房顫的發(fā)生；另一方面，房顫可以引起心房重構(gòu)和炎癥反應(yīng)的進(jìn)一步加重，從而促進(jìn)房顫的維持，即所謂的“房顫導(dǎo)致房顫”。因此，抗炎和抗氧化應(yīng)激治療可能成為房顫治療的新方法。
　　他汀類藥物，即羥甲基戊二酰輔酶 A還原酶抑制劑，是臨床廣泛應(yīng)用的降脂藥物。他汀類藥物除降脂穩(wěn)定斑塊的作用外，還具有抗炎、抗氧化應(yīng)激等作用。近年來(lái)，

4、一些臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，他汀類藥物具有預(yù)防房顫的作用。但是，現(xiàn)有的研究仍十分有限，不足以證明他汀的抗房顫作用，且他汀預(yù)防房顫的分子機(jī)制尚不完全清楚。髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）是由激活的中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等分泌的血紅素蛋白酶。它不僅與多種心血管疾病密切相關(guān)，還參與了房顫的發(fā)病機(jī)制。研究顯示，MPO催化多種活性物質(zhì)的生成，通過介導(dǎo)多種細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進(jìn)心房重構(gòu)，最終導(dǎo)致房顫；房顫患者心房MPO水平明

5、顯升高，而他汀類藥物能夠降低心血管患者血漿MPO水平。因此，他汀類藥物可能通過抑制心房MPO水平，抑制心房重構(gòu)，從而減少房顫的發(fā)生。
　　本研究通過持續(xù)快速心房起搏3周建立兔房顫模型，探討阿托伐他汀對(duì)心房電重構(gòu)和結(jié)構(gòu)重構(gòu)的影響及其可能的分子機(jī)制。
　　第一部分持續(xù)快速心房起搏兔房顫模型的建立
　　目的：探討采用快速心房起搏建立兔房顫模型的可行性，觀察模型制備后兔心房和心室結(jié)構(gòu)和功能的變化。
　　方法：
　　

6、20只新西蘭大白兔隨機(jī)分為兩組：快速心房起搏組（n=10）給予持續(xù)快速心房起搏3周；假手術(shù)組（n=10）不予起搏。
　　1觀察起搏前后兩組兔一般情況的變化，包括：體重、呼吸頻率和心率等。
　　2起搏前后分別對(duì)兩組兔行超聲心動(dòng)圖檢查評(píng)價(jià)心房和心室結(jié)構(gòu)和功能的變化。
　　3起搏前后分別對(duì)兩組兔行心房Burst刺激檢測(cè)兔房顫誘發(fā)率。
　　4起搏后對(duì)兩組兔心房組織進(jìn)行Masson染色評(píng)價(jià)心房間質(zhì)纖維化程度。
　　結(jié)

7、果：
　　1一般情況：20只新西蘭大白兔，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)快速心房起搏組成功7只，假手術(shù)組成功7只。起搏干預(yù)前兩組兔的體重，呼吸頻率和心率無(wú)明顯差異（P＞0.05）；起搏3周后將快速心房起搏組兔起搏器設(shè)置為關(guān)閉狀態(tài)，測(cè)得其呼吸頻率、心率較假手術(shù)組增加（P＜0.05）；體重較假手術(shù)組無(wú)明顯變化（P＞0.05）。
　　2超聲心動(dòng)圖各指標(biāo)變化：起搏前兩組心房和心室的各項(xiàng)超聲指標(biāo)無(wú)明顯差異（P＞0.05）。快速起搏3周后，與假手術(shù)組相比，

8、快速心房起搏組兔左心房?jī)?nèi)徑（LAD）、左心房最大容量（LAVmax）和左心房最小容量（LAVmin）明顯增加（P＜0.05），左心房射血分?jǐn)?shù)（LAEF）明顯下降（P＜0.05）；左心室舒張末期內(nèi)徑（LVEDD）無(wú)明顯差異（P＞0.05），左心室收縮末期內(nèi)徑（LVESD）略增加（P＜0.05），左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）略下降（P＜0.05）。
　　3房顫誘發(fā)率變化：起搏前行心電圖檢查，兩組家兔均為竇性心律，經(jīng)心房Burst刺激均未

9、能誘發(fā)房顫。起搏3周后，心電圖顯示：假手術(shù)組家兔仍為竇性心律，經(jīng)Burst刺激亦均未誘發(fā)房顫；快速心房起搏組兔關(guān)閉心房起搏器后，心電圖證實(shí)其均為竇性心律，經(jīng)Burst刺激后，7只兔子中有6只誘發(fā)持續(xù)性房顫（持續(xù)時(shí)間大于30分鐘），誘發(fā)率86％。
　　4心房纖維化程度變化：起搏3周后，心房組織Masson染色結(jié)果顯示快速心房起搏組間質(zhì)纖維化百分比（31%）較假手術(shù)組（5%）明顯增加（P＜0.05）。
　　結(jié)論：快速起搏心房3周

10、后，兔可誘發(fā)持續(xù)性房顫，出現(xiàn)明顯的心房重構(gòu)，而心室結(jié)構(gòu)和功能不受影響。因此快速心房起搏可以建立理想的兔房顫模型。
　　第二部分阿托伐他汀對(duì)快速心房起搏兔房顫模型心房電重構(gòu)的影響
　　目的：通過快速起搏心房3周建立兔房顫模型，探討阿托伐他汀對(duì)該房顫動(dòng)物模型心房電重構(gòu)的影響。
　　方法：
　　18只新西蘭大白兔隨機(jī)分為3組：對(duì)照組（n=6）給予快速心房起搏3周及生理鹽水灌胃（10ml/d）；阿托伐他汀組（n=6）給予

11、快速心房起搏3周及阿托伐他汀灌胃（2.5mg/kg/d，溶解于10ml生理鹽水中）；假手術(shù)組（n=6）不起搏，不給藥。
　　1采用S1S2程序遞減刺激法，分別于起搏前后測(cè)定3組兔心房有效不應(yīng)期（AERP）。
　　2起搏前后分別對(duì)3組兔行心房Burst刺激檢測(cè)兔房顫誘發(fā)率。
　　3采用PCR方法檢測(cè)3組兔心房Cav1.2和Kv4.3的mRNA含量。
　　4采用Western blot方法檢測(cè)3組兔心房Cav1.2和

12、Kv4.3的蛋白含量。
　　結(jié)果：
　　1 AERP檢測(cè)：起搏前三組兔AERP無(wú)明顯差異（P＞0.05）；起搏3周后，對(duì)照組和阿托伐他汀組的AERP與假手術(shù)組相比均明顯下降（P＜0.05），但阿托伐他汀組經(jīng)藥物治療后AERP較對(duì)照組增加（P＜0.05）。
　　2房顫誘發(fā)率檢測(cè)：起搏開始前行心電圖檢查，三組兔均為竇性心律，經(jīng)心房Burst刺激均未能誘發(fā)房顫。起搏3周后，心電圖顯示：三組兔仍為竇性心律；經(jīng)心房Burst刺激

13、后，假手術(shù)組兔均未誘發(fā)房顫，對(duì)照組6只兔中有5只誘發(fā)持續(xù)性房顫（誘發(fā)率83%），阿托伐他汀組6只兔中有4只誘發(fā)持續(xù)性房顫（誘發(fā)率67%）。
　　3心房組織Cav1.2和Kv4.3的mRNA水平檢測(cè)：起搏3周后，對(duì)照組和阿托伐他汀組心房 Cav1.2mRNA水平較假手術(shù)組明顯下降（ P＜0.05），但阿托伐他汀組經(jīng)藥物治療后Cav1.2mRNA水平較對(duì)照組增加（P＜0.05）；對(duì)照組和阿托伐他汀組心房 Kv4.3mRNA水平較假手術(shù)

14、組明顯下降（P＜0.05），且對(duì)照組和阿托伐他汀組的Kv4.3mRNA水平無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　4心房組織Cav1.2和Kv4.3蛋白水平的檢測(cè)：起搏3周后，對(duì)照組和阿托伐他汀組心房 Cav1.2蛋白水平較假手術(shù)組明顯下降（P＜0.05），但阿托伐他汀組經(jīng)藥物治療后其 Cav1.2蛋白水平較對(duì)照組增加（ P＜0.05）；對(duì)照組和阿托伐他汀組心房 Kv4.3蛋白水平較假手術(shù)組明顯下降（P＜0.05），且對(duì)照組和阿托伐他汀

15、組的Kv4.3蛋白水平無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：阿托伐他汀能夠抑制快速心房起搏兔房顫模型心房Cav1.2表達(dá)水平的下調(diào)和AERP的縮短，抑制心房電重構(gòu)。
　　第三部分阿托伐他汀對(duì)快速心房起搏兔房顫模型心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)的影響
　　目的：通過快速起搏心房3周建立兔房顫模型，探討阿托伐他汀對(duì)該房顫模型心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)的影響。
　　方法：
　　18只新西蘭大白兔隨機(jī)分為3組：對(duì)照組（n=6）給予快速心房起搏3

16、周及生理鹽水（10ml/d）；阿托伐他汀組（n=6）給予快速心房起搏3周及阿托伐他?。?.5mg/kg/d，溶解于10ml生理鹽水中）；假手術(shù)組（n=6）不起搏，不給藥。
　　1起搏前后分別對(duì)3組兔行超聲心動(dòng)圖檢查評(píng)價(jià)心房和心室的結(jié)構(gòu)和功能。
　　2對(duì)3組兔心房組織進(jìn)行Masson染色評(píng)價(jià)心房間質(zhì)纖維化程度。
　　3采用PCR方法檢測(cè)3組兔心房Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白mRNA含量。
　　4采用Western blot方

17、法檢測(cè)3組兔心房Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的蛋白含量。
　　結(jié)果：
　　1超聲心動(dòng)圖各指標(biāo)變化：快速起搏前三組兔心房的各項(xiàng)超聲指標(biāo)無(wú)明顯差異（P＞0.05）；快速起搏3周后，對(duì)照組和阿托伐他汀組兔左心房較假手術(shù)組明顯擴(kuò)張，LAD、LAVmax和LAVmin明顯增加（P＜0.05）， LAEF明顯下降（P＜0.05），但對(duì)照組和阿托伐他汀組相比較，兩組的LAD、LAVmax、LAVmin和LAEF均無(wú)明顯差異（P＞0.05）。快速起搏

18、前三組兔心室的各項(xiàng)超聲指標(biāo)（包括：LVESD、LVEDD和LVEF）無(wú)明顯差異（P＞0.05）；快速起搏3周后，三組兔的以上各項(xiàng)心室超聲指標(biāo)仍無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　2心房纖維化程度變化：快速起搏3周后，對(duì)三組兔心房組織進(jìn)行Masson染色，結(jié)果示：假手術(shù)組兔心房組織僅有少量的間質(zhì)纖維組織，約占心房組織的4%；對(duì)照組兔心房組織的纖維化程度較假手術(shù)組明顯增加（P＜0.05），間質(zhì)纖維組織約占心房組織的33%，；阿托伐他汀組

19、較假手術(shù)組亦明顯增加（P＜0.05），間質(zhì)纖維組織約占心房組織的24%，但其較對(duì)照組明顯下降（P＜0.05）。
　　3心房組織Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白mRNA表達(dá)水平檢測(cè)：起搏3周后，對(duì)照組和阿托伐他汀組心房Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白mRNA水平較假手術(shù)組明顯增加（P＜0.05），但阿托伐他汀組經(jīng)藥物治療后心房Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白水平較對(duì)照組下降（P＜0.05）。
　　4心房組織Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的蛋白表達(dá)水平檢測(cè)：起搏3周后，對(duì)照組和阿托

20、伐他汀組心房Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的蛋白表達(dá)水平較假手術(shù)組明顯增加（P＜0.05），但阿托伐他汀組經(jīng)藥物治療后心房Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白水平較對(duì)照組下降（P＜0.05）。
　　結(jié)論：阿托伐他汀能夠抑制快速心房起搏兔房顫模型心房間質(zhì)纖維化和膠原蛋白沉積，抑制心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)。
　　第四部分阿托伐他汀對(duì)快速心房起搏兔房顫模型心房重構(gòu)影響的機(jī)制探討
　　目的：通過快速起搏心房3周建立兔房顫模型，探討阿托伐他汀對(duì)該房顫模型心房重構(gòu)影響的可

21、能機(jī)制。
　　方法：
　　18只新西蘭大白兔隨機(jī)分為3組：對(duì)照組（n=6）給予快速心房起搏3周及生理鹽水（10ml/d）；阿托伐他汀組（n=6）給予快速心房起搏3周及阿托伐他?。?.5mg/kg/d，溶解于10ml生理鹽水中）；假手術(shù)組（n=6）不起搏，不給藥。
　　1采用PCR方法檢測(cè)3組兔心房MPO、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2、MMP-9和金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMP）-1的mRNA含量。
　　2采用We

22、stern blot方法檢測(cè)3組兔心房MPO、MMP-2、MMP-9和TIMP-1的蛋白含量。
　　結(jié)果：
　　1心房組織MPO、MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA表達(dá)水平的檢測(cè)：起搏3周后，對(duì)照組和阿托伐他汀組 MPO、MMP-2和 MMP-9的mRNA表達(dá)水平較假手術(shù)組表明顯增加（P＜0.05），但阿托伐他汀組經(jīng)藥物治療后其心房組織中此三種 mRNA的表達(dá)較對(duì)照組下降（P＜0.05）；對(duì)照組和阿托伐他汀組TI

23、MP-1 mRNA表達(dá)水平較假手術(shù)組明顯增加（P＜0.05），且對(duì)照組和阿托伐他汀組TIMP-1 mRNA的表達(dá)無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　2心房組織MPO、MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)：起搏3周后，對(duì)照組和阿托伐他汀組MPO、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)水平較假手術(shù)組明顯增加（P＜0.05），但阿托伐他汀組經(jīng)藥物治療后其心房組織中此三種蛋白的表達(dá)較對(duì)照組下降（P＜0.05）；對(duì)照組和阿托伐他汀組