瑞舒伐他汀對(duì)心肌梗死兔心房神經(jīng)重構(gòu)與電重構(gòu)的影響.pdf

1、目的:
　　心肌梗死是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康與生命的心血管病急癥，其死亡率極高。近年來(lái)，心肌梗死漸趨年輕化，且常引起室性與房性心律失常，是造成死亡率較高的重要原因，因此對(duì)心梗后并發(fā)癥的預(yù)防與治療逐漸引起臨床醫(yī)師的重視，通過(guò)藥物改善心肌梗死后并發(fā)癥及預(yù)后迫在眉睫。心肌梗死后會(huì)伴隨發(fā)生心室重構(gòu)，心室重構(gòu)不僅能夠使心血管患者心功能?chē)?yán)重減退，并發(fā)癥發(fā)生率明顯增加，而且使患者的死亡率也明顯增加。其主要特征是心肌肥厚、心肌細(xì)胞凋亡，某些細(xì)胞（成肌纖

2、維細(xì)胞）和非細(xì)胞成分（膠原纖維）的異常增加，心肌代謝以及電生理的改變，是造成心律失常的重要原因。目前研究熱點(diǎn)多集中在心梗后心室重構(gòu)在室性心律失常中的作用，心梗后心房重構(gòu)研究較少見(jiàn)。今年有研究表明心肌梗死患者，特別是做事收縮功能減低患者有非常高的房顫發(fā)病率，且死亡率亦升高3倍。所以應(yīng)重視房顫的防治與機(jī)制的研究。目前研究提示心房顫動(dòng)等心律失常的發(fā)生機(jī)制可能與心房的結(jié)構(gòu)重構(gòu)、神經(jīng)重構(gòu)與電重構(gòu)有關(guān)。研究重點(diǎn)應(yīng)集中在明確心梗后心房是否發(fā)生重構(gòu)，且

3、盡可能探討其發(fā)生機(jī)制。近年來(lái)，他汀類(lèi)藥物的研究成為熱點(diǎn)，主要體現(xiàn)在其作用機(jī)制的多效性，如抗炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激、改善內(nèi)皮功能、抗血栓、保護(hù)心肌、抗心律失常等多重效應(yīng)。其中他汀類(lèi)藥物抗心律失常及防止心臟重構(gòu)的作用已得到普遍關(guān)注，成為近年研究的熱點(diǎn)之一。本實(shí)驗(yàn)研究旨在探討心肌梗死后心房神經(jīng)重構(gòu)的發(fā)生及其可能機(jī)制，瑞舒伐他汀對(duì)心房重構(gòu)的影響。
　　方法:
　　自西嶺角動(dòng)物養(yǎng)殖中心選購(gòu)28只健康新西蘭大白兔（普通級(jí)），均為雄性，體重

4、（2.2±0.3）kg，（5±1）月齡。經(jīng)山東省千佛山醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室普通飼料喂養(yǎng)2周后，參照Fujita M等報(bào)道采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支方法建立兔心肌梗死模型。麻醉兔最常采用的麻藥為3％戊巴比妥鈉，按照45mg/kg劑量經(jīng)兔耳緣靜脈緩慢注射麻藥，當(dāng)兔頭低垂時(shí)注意減慢注射速度，觀察角膜反射與肌張力，當(dāng)兔角膜反射消失、肌肉松弛時(shí)，提示此次麻醉成功，應(yīng)立即停止注射，以免兔麻醉過(guò)深導(dǎo)致死亡。同時(shí)為避免手術(shù)中污染引起兔感染，所有實(shí)驗(yàn)兔

5、均需術(shù)前30min給予青霉素(10萬(wàn)/kg)肌注，術(shù)后連續(xù)3天，每天2次青霉素(10萬(wàn)/kg)注射預(yù)防感染。麻醉后將兔固定于小型動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上。備皮和消毒后，術(shù)者戴無(wú)菌手套后鋪洞巾。術(shù)前所有兔均需行常規(guī)心電圖檢查。保持兔自然呼吸，緊貼胸骨左緣3、4肋間縱行切開(kāi)皮膚、皮下組織及肌肉，并切斷左側(cè)第3、4肋軟骨，游離出3-4cm左右縱行切口，此時(shí)需謹(jǐn)慎小心地?fù)荛_(kāi)縱膈胸膜，借助小型撐開(kāi)器緩慢地充分暴露心臟前面，注意保持兩側(cè)胸膜完整，以免造成氣胸。

6、再用止血鉗輕輕夾起心包壁層并剪開(kāi)，輕抬心臟以便充分暴露左冠狀動(dòng)脈前降支，仔細(xì)觀察兔左冠狀動(dòng)脈及其分支（或左室支）的解剖位置。于前降支中上1/3處用6-0縫合線結(jié)扎血管。15分鐘后直視下可明顯見(jiàn)左心室前壁和心尖部心肌顏色逐漸由紅變暗紅乃至蒼白，中心缺血區(qū)域周邊有暗紅色充血帶顯示，心臟搏動(dòng)減弱。15分鐘后行心電圖檢查以進(jìn)一步明確是否造成心肌梗死模型，如可見(jiàn)(Ⅰ)、aVL導(dǎo)聯(lián)ST段明顯抬高，證實(shí)心肌梗死模型復(fù)制成功。術(shù)中應(yīng)充分止血，心包不予縫

7、合，最后逐層縫合關(guān)胸，密切觀察一段時(shí)間至兔自然蘇醒，送回飼養(yǎng)室，術(shù)后10小時(shí)內(nèi)不予喂食固體食物。心肌梗死模型制作完畢24小時(shí)后將仍存活兔隨機(jī)分為心梗組和藥物干預(yù)組。假手術(shù)組實(shí)驗(yàn)兔僅左前降支相同位置下穿線，但不結(jié)扎。自術(shù)后第一天開(kāi)始，藥物干預(yù)組給予瑞舒伐他?。?0mg/kg/d，阿斯利康制藥生產(chǎn)）灌胃8周，心梗組及假手術(shù)組以等量生理鹽水灌胃8周。最終獲得具有完整實(shí)驗(yàn)資料的兔共24只，分別為:心梗組(MI，n=7)、藥物干預(yù)組(Rt，n=8

8、)、假手術(shù)組(S，n=9)。各組實(shí)驗(yàn)兔經(jīng)不同方式灌胃8周后稱(chēng)取體重，應(yīng)用10％水合氯醛以2ml/kg劑量進(jìn)行腹腔注射麻醉后再次開(kāi)胸。充分暴露心臟后，可見(jiàn)心臟前壁與心尖部位搏動(dòng)明顯較其他部位弱。主要大血管用止血鉗夾住，剪去大血管，迅速取出心臟，立即用無(wú)菌生理鹽水沖洗，盡量在冰上操作，保持低溫環(huán)境，剪去右房、左室及右室，分離左房并分成兩部分處理。一部分新鮮組織立即凍存于-196℃液氮中，同時(shí)做好標(biāo)注，用于蛋白印跡技術(shù)與基因擴(kuò)增技術(shù)。另一部分

9、新鮮組織置于包埋盒中放入4％多聚甲醛固定，用鉛筆做好標(biāo)記，用于免疫組織化學(xué)技術(shù)。采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase， TH)及膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶組織表達(dá)量，通過(guò)Western Blot法測(cè)定心房組織酪氨酸羥化酶蛋白表達(dá)量，熒光定量PCR法檢測(cè)酪氨酸羥化酶和KCND3鉀離子通道蛋白mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.心房組織TH與CHAT陽(yáng)性神經(jīng)纖維再生現(xiàn)象:灌胃8周后對(duì)兔心房組織中自

10、主神經(jīng)重構(gòu)變化進(jìn)行分析，通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)得到的結(jié)果顯示:假手術(shù)組兔心房組織TH和CHAT神經(jīng)纖維陽(yáng)性染色較少，心梗組TH和CHAT陽(yáng)性神經(jīng)纖維較多，而藥物干預(yù)組較少。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果示:心肌梗死組兔的心房TH和CHAT陽(yáng)性神經(jīng)纖維密度明顯高于假手術(shù)組，而藥物干預(yù)組的TH和CHAT陽(yáng)性神經(jīng)纖維密度明顯低于心梗組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);藥物干預(yù)組上述指標(biāo)與假手術(shù)組水平無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　2.心房

11、組織TH mRNA的表達(dá)水平:采用熒光定量PCR法檢測(cè)TH mRNA表達(dá)水平并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得到結(jié)果:與假手術(shù)組相比，心梗組TH mRNA表達(dá)水平升高，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析證明具有明顯差異(P＜0.05);與心肌梗死組相比，藥物干預(yù)組TH mRNA表達(dá)下調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，藥物干預(yù)組上述指標(biāo)與假手術(shù)組水平無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　3.心房組織KCND3鉀離子通道蛋白mRNA的表達(dá)水平:應(yīng)用熒光定量PCR法檢

12、測(cè)KCND3鉀離子通道蛋白mRNA表達(dá)水平并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得到結(jié)果:與假手術(shù)組相比，心梗組KCND3鉀離子通道蛋白mRNA表達(dá)下調(diào)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析證明差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與心梗組相比，藥物干預(yù)組KCND3鉀離子通道蛋白mRNA表達(dá)上調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，藥物干預(yù)組上述指標(biāo)與假手術(shù)組水平無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　4.心房酪氨酸羥化酶表達(dá):采用蛋白印跡技術(shù)測(cè)定TH蛋白水平表達(dá)量得到如下結(jié)果