骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植聯(lián)合瑞舒伐他汀對(duì)大鼠急性心肌梗死的保護(hù)作用.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）治療大鼠急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI），并應(yīng)用瑞舒伐他汀抗炎癥和改善內(nèi)皮功能等生物學(xué)效應(yīng)提高移植BMSCs的存活率，進(jìn)一步達(dá)到提高治療效果的目的。
　　方法:1、BMSCs分離、體外培養(yǎng)及誘導(dǎo)：全骨髓貼壁法分離BMSCs，定期更換培養(yǎng)基培養(yǎng)；應(yīng)用5-氮胞苷（5-aza）做為誘導(dǎo)劑，使

2、其向心肌細(xì)胞誘導(dǎo)；誘導(dǎo)前后，對(duì)細(xì)胞行免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)進(jìn)行鑒定。2、將40只SD大鼠完全隨機(jī)分為4組后，采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支的方法造成AMI模型：1）對(duì)照組，造模前1周開始給予2ml生理鹽水灌胃，1次/天，共1周；造模后，在心肌梗死區(qū)及邊緣區(qū)分5點(diǎn)注射空白DMEM培養(yǎng)基。2）藥物組：造模前1周開始給予2ml瑞舒伐他汀溶液（1mg/ml）灌胃，1次/天，共1周。造模后，在心肌梗死區(qū)及邊緣區(qū)分5點(diǎn)注射空白DMEM培養(yǎng)基。3）移植組：造模前1

3、周開始給予2ml生理鹽水灌胃，1次/天，共1周。造模后，在心肌梗死區(qū)及邊緣區(qū)分5點(diǎn)注射2×106個(gè)BMSCs。4）聯(lián)合組：造模前1周開始給予2ml瑞舒伐他汀溶液（1mg/ml）灌胃，1次/天，共1周。造模后，在心肌梗死區(qū)及邊緣區(qū)分5點(diǎn)注射2×106個(gè)BMSCs。3造模后，觀察心電圖變化及心肌H.E染色確定心肌梗死模型制備成功。術(shù)后8h抽取腹主動(dòng)脈血，離心分離血清，采用ELISA法定量檢測(cè)血清中白介素8（IL-8）、腫瘤壞死因子α（TNF

4、-α）及心肌肌鈣蛋白T（cTnT）的表達(dá)情況。術(shù)后4周，對(duì)其整個(gè)心臟及左心室進(jìn)行稱重，計(jì)算左心室重量以及百分比評(píng)估左心室肥厚程度；熒光顯微鏡下觀察移植BMSCs存活情況。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料正態(tài)分布數(shù)據(jù)以?x±s，組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），獨(dú)立樣本比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1、BMSCs接種后，少量細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)不規(guī)則：紡錘形、三角

5、形，培養(yǎng)增值后呈漩渦狀細(xì)胞集落群。傳代后，混雜細(xì)胞隨著換液被清除，BMSCs分布均勻，形態(tài)較單一，多呈長(zhǎng)梭形。BMSCs表面標(biāo)記物表現(xiàn)為CD44陽(yáng)性表達(dá)，即胞漿中有棕黃色顆粒，CD34陰性表達(dá)。2、結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈前降支后，肉眼可見結(jié)扎血管周圍及以下心肌立即呈灰白色；心電圖ST段呈弓背向上抬高改變，30分鐘左右逐漸恢復(fù)至基線。3、IL-8、TNF-α及cTnT表達(dá)情況：與對(duì)照組比較，藥物組、移植組和聯(lián)合組IL-8、TNF-α及cTnT水

6、平均下降；聯(lián)合組比藥物組、移植組下降更明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。4、左心室重量及百分比結(jié)果：與對(duì)照組比較，藥物組、移植組和聯(lián)合組左心室重量、左心室/全心百分比均降低；聯(lián)合組比藥物組、移植組降低更加顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。5、移植存活細(xì)胞的計(jì)數(shù)：對(duì)比聯(lián)合組和移植組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物移植后存活細(xì)胞的數(shù)量，聯(lián)合組的成活細(xì)胞明顯多于移植組（P＜0.05）。
　　結(jié)論:1、BMSCs經(jīng)5-氮胞苷誘導(dǎo)可以向心肌細(xì)胞分化。2