攜帶Livin基因的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療對(duì)急性心肌梗死大鼠心功能的影響.pdf

1、目的:
　　研究攜帶Livin基因的重組腺病毒感染后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)急性心肌梗死大鼠心功能的影響以及l(fā)ivin和促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7、caspase-9在感染前后細(xì)胞中的表達(dá)水平的變化。
　　方法:
　　(1)通過(guò)全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀鑒定其表面分子標(biāo)記物CD29、34、45和90的表達(dá)。轉(zhuǎn)染攜帶Livin基因的重組腺病毒后用流式檢測(cè)其對(duì)MSCs凋亡的影響。

2、
　　(2)通過(guò)Western blot印跡法分別檢測(cè)Livin、capase3、caspase-7、caspase-9的蛋白表達(dá)情況
　　(3)采用冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎法建立心肌梗死模型,然后實(shí)驗(yàn)分四組進(jìn)行:A組:注射無(wú)胎牛血清的DMEM組(100uL);B組注射MSCs組(100uL,約l×106個(gè)細(xì)胞);C組:注射rAd-control/MSCs組(100uL,約l×106個(gè)細(xì)胞);D組:注射rAd-livin/MSC

3、s組(100ul,約1×106個(gè)細(xì)胞),各組細(xì)胞注射之前都需進(jìn)行DAPI染色。
　　(4)采用生理儀記錄各組大鼠左室收縮壓(LVSP)、左室舒張壓(LVDP)、左室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dtmax)、左室最內(nèi)壓最大下降速率(-dp/dtmax)來(lái)評(píng)價(jià)大鼠心功能,記錄后取出大鼠心臟行冰凍切片,熒光顯微鏡下觀察的DAPI染色細(xì)胞的數(shù)量。
　　結(jié)果:
　　(1) rAd-livin感染MSCs后其凋亡率與正常組和空載組相

4、比都顯著降低(P<0.05),促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7或caspase-9在細(xì)胞中的表達(dá)水平下降(P<0.05);
　　(2)急性心肌梗死大鼠隨機(jī)分四組注射無(wú)血清的 DMEM、MSCs、rAd-control/MSCs、rAd-livin/MSCs后,MSCs、rAd-control/MSCs、rAd-livin/MSCs組心功能較DMEM組有顯著改善(P<0.05),而MSCs、rAd-control/M

5、SCs、rAd-livin/MSCs三組之間無(wú)顯著差異(P>0.05),但rAd-livin/MSCs組心功能改善更明顯,且移植后存活的干細(xì)胞數(shù)量顯著多于其它兩組(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1) rAd-livin感染MSCs后降低MSCs凋亡率,并且降低促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7或caspase-9在細(xì)胞中的表達(dá)水平;
　　(2)rAd-livin/MSCs移植可進(jìn)一步改善心肌梗死大鼠