2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:應用地塞米松(DEX)誘導的大鼠胰島INS-1細胞凋亡模型。探討糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)在糖皮質(zhì)激素誘導胰島β細胞凋亡過程中的作用及可能的分子機制,為進一步闡明類固醇性糖尿病的發(fā)生機制提供實驗依據(jù)。
  方法:1選用大鼠胰島β細胞株INS-1細胞作為研究對象,首先應用MTT法檢測不同濃度(0、0.01、0.1、1μM)DEX作用細胞1,2,3d時細胞增殖情況,確定DEX的最佳作用濃度和作用時間;2不同濃度DEX作用

2、INS-1細胞48h后通過臺盼藍染色、Tunel染色和流式細胞術(shù)檢測細胞死亡情況;3免疫熒光染色方法觀察DEX誘導后,INS-1細胞中GSK-3β和p-GSK-3β(Ser9)的蛋白表達;40.1μM DEX處理 INS-1細胞48h后,采用 Real-time PCR方法檢測 SOD、iNOS、Nox4、NADPH oxidase(p47phox)和GSK-3βmRNA的表達;采用 western-blot方法檢測GSK-3β、p-G

3、SK-3β(Ser9)、SOD、iNOS和Nox4蛋白的表達;采用ROS試劑盒、Griess法檢測ROS及NO的釋放水平。5觀察加入GSK-3β抑制劑LiCl后上述各項指標變化。
  結(jié)果:DEX(0、0.01、0.1、1μM)作用INS-1細胞1--3天,隨著DEX劑量和時間增加,INS-1細胞存活率下降;Tunel染色、流式細胞術(shù)證實0.1μΜ濃度的DEX作用INS-1細胞48h時,細胞出現(xiàn)明顯的凋亡現(xiàn)象,并且與對照組相比,細

4、胞培養(yǎng)上清中的ROS、NO水平升高,Nox4、p47phox、iNOS mRNA表達上調(diào),SOD mRNA表達下調(diào);iNOS、Nox4蛋白表達水平升高,SOD、p-GSK-3β(Ser9)蛋白表達明顯降低,總GSK-3β蛋白表達無明顯變化。加入LiCl后DEX誘導的細胞凋亡率明顯下降,ROS、NO水平降低,Nox4、p47phox、iNOS mRNA表達及iNOS、Nox4蛋白表達均明顯下調(diào),p-GSK-3β(Ser9)蛋白表達上調(diào),差

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