神經元凋亡時GSK-3介導Bim線粒體轉位的研究.pdf

1、中山大學碩士學位論文神經元凋亡時GSK-3介導Bim線粒體轉位的研究姓名：閔志群申請學位級別：碩士專業(yè)：藥理學指導教師：黎明濤20090520l l I 山人學碩士學位論文 神經元凋亡時G S K ．3 介導B i m 線粒體轉位的研究為明確小腦顆粒神經元凋亡時B i m 細胞內呈現(xiàn)局部聚集現(xiàn)象足否是因為發(fā)生線粒體轉位而引起，我們采用特異的線粒體熒光染料M i t 0 1 ' r a c k e r 及B i m 抗體分別標記線

2、粒體及B i m ，分析兩者的共定位系數。結果表明：凋亡時，B i m 與線粒體的共定位系數增加，說明在撤鉀誘導的C G N 凋亡模型中B i m 發(fā)生了線粒體轉位。進一步，我們尋找凋亡時介導B i m 線粒體轉位的上游信號。B i m 在生理狀態(tài)下主要與動力蛋白結合而不能定位于線粒體。采用生物信息學方法對B i m 的氨基酸序列進行分析，發(fā)現(xiàn)在與動力蛋白輕鏈D L C l 結合的關鍵區(qū)域中，有一段序列符合G S K ．3底物模序，且該

3、序列在不同種屬間相對保守。提示B i m 的線粒體轉位可能是由G S K ．3介導的。G S K - 3 ( g l y c o g e ns y n t h a s ek i n a s e ．3 ) 是一個多功能的絲氨酸／蘇氨酸激酶，包含兩個亞型：G S K 3 aa n dG S K 3 D 。G S K 3 僅的第2 l 位絲氨酸和G S K 3 D 的第9 位絲氨酸被上游的激酶磷酸化后，G S K ．3 的活性降低。在撤鉀誘導

4、小腦顆粒神經元凋亡時，此位點的磷酸化水平降低，G S K ．3 活性增強。通過G S K ．3 抑制劑抑制G S K ．3 的激酶活性，可以有效地保護神經元，但神經元凋亡時G S K ．3 的底物尚不明確，各種證據表明是通過破壞線粒體引起的凋亡，這也為G S K ．3 介導B i m 線粒體轉位提供了一定的理論基礎。為了說明G S K ．3 與B i m 線粒體轉位的關系，我們在撤鉀處理時加入G S K ．3 的抑制劑，再分析B i m

5、 和線粒體的共定位系數。結果顯示：G S K ．3 的抑制劑C T 9 9 0 2 l 和S B 4 1 5 2 8 6 抑制了B i m 的線粒體轉位。進一步為了排除G S K ．3 抑制劑的非特異作用，我們設計了G S K ．3 的小分子干擾片段。與對照片段相比，G S K ．3 的小分子干擾片段有效的抑制了凋亡時B i m 的線粒體轉位。以上結果初步表明，B i m 的線粒體轉位可能是由G S K ．3 介導的。綜上所述，本課題首