2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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文檔簡介

1、目的：構建重組厭氧芽胞梭菌saccharobutylicumβ-1，4葡聚糖內切酶啟動子及信號肽(eglAp)-人表皮生長因子受體2胞外區(qū)(hHer2/neu ECD)-人白細胞介素12(rhIL12)融合基因穿梭表達載體(pIMP1eglAp-hHer2/neu ECD-rhIL12)，為進一步制備eglAp-hHer2/neu-rhIL12融合基因修飾的重組厭氧芽胞梭菌，進行Her2/neu陽性實體腫瘤基因治療的研究奠定基礎。

2、>　　 方法：①以含有全長hHer2/neu序列的真核表達質粒(pcDNA3.1 hHer2/neu)為模板，采用PCR方法，擴增hHer2/neu ECD基因片段(1896bp)，通過酶切連接的方法，將其插入重組rhIL12真核表達質粒pcDNA6 rhIL12(p1)dP的rhIL12基因上游，獲得pcDNA6 hHer2/neu ECD-rhIL12(p2)真核表達質粒。②設計合成eglAp基因中一段55bp序列作為模板，通過連

3、續(xù)PCR的方法，擴增eglAp基因片段(335bp)，并構建T-eglAp(p3)亞克隆質粒。③通過酶切連接的方法，將eglAp片段插入p2質粒中的hHer2/neu ECD基因上游，構建pcDNA6 eglAp-hHer2/neu ECD-rhIL12(p4)真核表達質粒。④以p4真核表達質粒為模板，擴增eglAp-hHer2/neuECD-rhIL12融合基因片段(4.0kb)，通過in-fusion技術，將其插入pIMP1穿梭表達

4、質粒，構建重組pIMP1 eglAp-hHer2/neu ECD-rhIL12(p5)穿梭表達載體，并進行菌液PCR、酶切及測序鑒定。
　　 結果：①獲得hHer2/neu ECD基因片段和pcDNA6 hHer2/neu ECD-rhIL12真核表達質粒。②獲得eglAp基因片段和T-eglA p亞克隆質粒。③獲得pcDNA6 eglAp-hHer2/neu ECD-rhIL12真核表達質粒。④獲得eglAp-hHer2/ne

5、u ECD-rhIL12融合基因片段及重組pIMP1 eglAp-hHer2/neu ECD-rhIL12穿梭表達載體，其PCR產物和酶切片段與預期一致，測序結果證實融合基因各序列與GenBank中序列一致。
　　 結論：成功地構建了重組大腸桿菌-厭氧芽胞梭菌融合基因穿梭表達載體(pIMP1eglAp-hHer2/neu ECD-rhIL12)，為進一步制備eglAp-hHer2/neu-rhIL12融合基因修飾的厭氧芽胞梭菌，

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