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1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文登革2型病毒的分離純化及其核衣殼蛋白的表達(dá)姓名:戴偉君申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):生物物理指導(dǎo)教師:張景強(qiáng)20040521———墨!墨二——量蘭!型墮童箜坌童絲些墨苧墮壅塞蘭旦箜室竺!生苧蘭堡主芏堡壘查PurificationandidentificationofDen2virusandexpressionofitscapsidgeneDaiWeijunAbstractThefirststepofcro—EMrecons
2、tructionistoobtainlargenumbersofvirionswhicharepureandretainedpreviousbiologicstructureinsamplesC6/36AedesalbopictuswereselectedtopropagateDen2virusCellswereinfectedwithDen一2virusandculturedat36℃withthepHoftheMEMat613~68
3、WhencellswereinCPEstage~theviroswerepurifiedfromcellculturebydifferentcentrifugatinnsplussugardensitygradientcentrifugationsThevirionspurifiedaccordwiththerequestofClOEMreconstructionThevironswereconfirmedfirstbyIFASecon
4、dlythevironswereidentifiedbyPCRtechniquewithserogroup—primersorrandomprimersTheamplifiedfragmentsweresequencedanditwascomparedwithDen一2virusNewGuinesCstrainknownfromGenBankTheresultshowedthattheirhomologywas99%,suggestin
5、gthattheparticlepurifiedwasexactDen一2virusNewGuinesCstrainThevironscanbeusedinfurtherstudyforthehighresolutioncro—EMreconstructionandthestudyoftheinteractionbetweenDen2virusanditsantibodiesOntheotherhand,theCgenefromDen2
6、virushadbeenclonedintotheEcoliexpressionvectorpET28b(),creatingtherecombinantplasmidPETDen一2一C,whichwasthentransformedintoDE3SDSPAGEandwestern—blotanalysisshowedthattheCgenewasexpressedinthestrainDE3(PETDen2C)withthemole
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