普拉克索誘導(dǎo)的低體溫對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的抑制作用及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分普拉克索誘導(dǎo)大鼠低體溫的研究
　　目的：研究普拉克索是否具有降溫作用以及不同劑量的普拉克索誘導(dǎo)大鼠低體溫的效果。
　　方法：將42只成年健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為7組，每組6只，分別接受0 mg/kg，0.125 mg/kg，0.25 mg/kg，0.5 mg/kg，1.0 mg/kg，1.5 mg/kg和2.0 mg/kg體重的普拉克索腹腔注射，持續(xù)監(jiān)測(cè)大鼠體溫變化，選擇合適的藥物濃度。
　　結(jié)果：1.持續(xù)動(dòng)物

2、體溫檢測(cè)顯示，與0.125 mg/kg體重相比，0.25 mg/kg體重的普拉克索可以更穩(wěn)定地維持大鼠體溫在34~36℃，給藥間隔時(shí)間為8 h。2.與0.25 mg/kg體重組死亡率（0％）相比，0.5 mg，1.0 mg，1.5 mg，2.0 mg/kg體重組均出現(xiàn)不同程度死亡。
　　結(jié)論：1.多巴胺受體激動(dòng)劑普拉克索可以誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生低體溫；
　　2.0.25 mg/kg體重的普拉克索可以安全有效地誘導(dǎo)大鼠體溫在34~36

3、℃之間；
　　第二部分普拉克索誘導(dǎo)的低體溫對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的抑制作用
　　目的：研究普拉克索誘導(dǎo)的低體溫對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）后早期腦損傷（EBI）的影響。
　　方法：將30只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、SAH組以及SAH+普拉克索，SAH+普拉克索+復(fù)溫組等5組，每組6只。所有SAH大鼠經(jīng)自體股動(dòng)脈抽取非肝素化動(dòng)脈血注入視交叉前池，致SAH模型，在SAH后48h處死大鼠。假手

4、　　術(shù)組大鼠進(jìn)行股動(dòng)脈采血并予顱骨鉆孔，但未進(jìn)行注血，于處理后48h處死大鼠。此外，普拉克索處理：在SAH建模后立即接受0.25 mg/kg體重的普拉克索腹腔注射。復(fù)溫處理：進(jìn)行普拉克索腹腔注射后通過加熱毯維持大鼠體溫在37℃。各組大鼠均接受持續(xù)體溫監(jiān)測(cè)。建模后48h，大鼠安樂死，取材。首先通過TUNEL染色方法檢測(cè)腦細(xì)胞的凋亡情況；通過western blot檢測(cè)腦組織中的白蛋白含量（即白蛋白泄露）分析血腦屏障的完整性；通過行為學(xué)評(píng)分

5、評(píng)估行為能力；分析在SAH條件下，普拉克索是否可以誘導(dǎo)體低溫，以及普拉克索對(duì)SAH引起的早期腦損傷的影響。其次，對(duì)SAH組，SAH+普拉克索以及SAH+普拉克索+復(fù)溫組進(jìn)行血腦屏障完整性和行為能力評(píng)估，分析普拉克索是否通過誘導(dǎo)低體溫發(fā)揮作用。綜上分析，在SAH條件下，普拉克索對(duì)SAH引起的早期腦損傷的影響，普拉克索是否通過誘導(dǎo)體低溫發(fā)揮作用。
　　結(jié)果：1.持續(xù)動(dòng)物體溫檢測(cè)顯示，在SAH條件下，腹腔注射0.25 mg/kg體重的普

6、拉克索可以穩(wěn)定地維持大鼠體溫在34~36℃，給藥間隔時(shí)間為8 h。2. TUNEL染色結(jié)果顯示，正常組和假手術(shù)組中僅出現(xiàn)少量的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞；與假手術(shù)組相比，SAH組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量極其顯著的增多，而普拉克索誘導(dǎo)的低體溫可以有效地降低SAH引起的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量增多。3.Western blot檢測(cè)腦組織中白蛋白的含量，結(jié)果顯示正常組和假手術(shù)組腦組織中白蛋白含量極低，且之間沒有顯著差異；與假手術(shù)組相比，SAH組腦組織中白

7、蛋白含量極其顯著的升高，而普拉克索誘導(dǎo)的低體溫可以有效地降低SAH引起的腦組織中白蛋白含量的升高。4，行為學(xué)評(píng)分結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，SAH組行為學(xué)能力顯著降低，而普拉克索誘導(dǎo)的低體溫可以有效緩解SAH引起的行為學(xué)能力降低。5，對(duì)SAH組，SAH+普拉克索以及SAH+普拉克索+復(fù)溫組進(jìn)行血腦屏障完整性和行為能力評(píng)估，結(jié)果顯示：SAH條件下，普拉克索對(duì)血腦屏障的保護(hù)和行為學(xué)的改善均被復(fù)溫處理顯著抑制。
　　結(jié)論：1. SAH條件

8、下，大鼠腦細(xì)胞凋亡和血腦屏障破壞，行為學(xué)能力下降。
　　2.普拉克索誘導(dǎo)的低體溫可以有效地抑制 SAH引起的腦細(xì)胞凋亡和血腦屏障破壞，有效改善行為學(xué)能力，發(fā)揮腦保護(hù)作用。
　　3.復(fù)溫抑制普拉克索的腦保護(hù)作用，進(jìn)一步說(shuō)明普拉克索通過誘導(dǎo)低體溫發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
　　4.SAH條件下，普拉克索通過誘導(dǎo)低體溫抑制SAH引起的EBI。
　　第三部分普拉克索誘導(dǎo)的低體溫在蛛網(wǎng)膜下腔出血后發(fā)揮腦保護(hù)的作用機(jī)制
　　目

9、的：研究普拉克索誘導(dǎo)的藥物性低溫是否通過 PI3K/AKT/GSK3β這一信號(hào)通路發(fā)揮保護(hù)作用。
　　方法：將30只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為SAH組（n=6）和SAH+普拉克索組（n=24）; SAH+普拉克索組的24只大鼠又隨機(jī)分為溶劑對(duì)照組，PI3K抑制劑LY294002組，AKT抑制劑MK-2206組以及GSK3β抑制劑CHIR99021組等4組，每組6只。各抑制劑與普拉克索同時(shí)進(jìn)行腹腔注射。首先，通過western blo

10、t檢測(cè)普拉克索處理對(duì)bcl-2的蛋白水平，caspase3活化以及PI3K/AKT/GSK3β通路的影響；其次，通過 western blot檢測(cè)各抑制劑在該動(dòng)物模型中是否發(fā)揮作用；最后，通過western blot檢測(cè)各組腦組織中白蛋白含量和活化的caspase3水平，以及通過TUNEL和FJB染色，行為學(xué)評(píng)分檢測(cè)在PI3K/AKT/GSK3β這一通路被阻斷的情況下，普拉克索誘導(dǎo)的低體溫是否還能發(fā)揮腦保護(hù)作用。
　　結(jié)果：1，在

11、SAH條件下，普拉克索處理有效地上調(diào)了bcl-2的蛋白水平，抑制了caspase3的活化，激活了PI3K/AKT/GSK3β通路。2，在SAH條件下，LY294002可以有效地抑制PI3K，AKT和GSK3β的磷酸化；MK-2206可以有效地抑制AKT和GSK3β的磷酸化；CHIR99021可以有效地抑制GSK3β的磷酸化。3，在各阻斷劑存在的情況下，普拉克索誘導(dǎo)的低體溫不能有效地抑制SAH誘導(dǎo)的caspase3的活化，血腦屏障破壞，腦

12、細(xì)胞凋亡和神經(jīng)元壞死，行為能力喪失。
　　結(jié)論：1.在SAH條件下，普拉克索有可能是通過激活了PI3K/AKT/GSK3β通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
　　2.在SAH條件下，加入PI3K抑制劑LY294002可抑制下游蛋白AKT和GSK3β磷酸化，不能發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
　　3.在SAH條件下，PI3K抑制劑LY294002，AKT抑制劑MK-2206以及GSK3β抑制劑CHIR99021均可抑制普拉克索誘導(dǎo)的藥物性低溫的