正電子標記納米探針 68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC的制備方法及其體內外生物學評價.pdf

1、目的：合成NOTA-DGL及NOTA-DGL-PEG-RGDyC兩種前體，分別對其進行正電子放射性標記及體內外生物學評價。
　　方法：
　　1.前體的合成。
　?、貼OTA-DGL的制備：DGL與NOTA-NHS溶于在DMSO溶液中室溫下避光反應24h。反應結束后，進行氨基乙?；磻詈笥么姿徕c緩沖液進行透析。
　?、贜OTA-DGL-PEG-RGDyC的制備： NHS-PEG-MAL與RGDyC在醋酸鈉緩沖液

2、中室溫下避光反應5min，反應結束后加入DGL，再加入硼酸緩沖液繼續(xù)反應24h。反應結束后，加入過量β-巰基乙醇。NOTA-NHS溶于DMSO溶液，繼續(xù)室溫下避光反應24h，最后用醋酸鈉緩沖液進行透析。
　　2.顯像劑的制備。
　　用鹽酸從鍺-鎵發(fā)生器中淋洗出68GaCl3，與前體在70℃下避光反應10～15min。
　　3.脂水分配系數測定實驗。
　　4.體外穩(wěn)定性實驗。
　　5.細胞攝取及洗脫實驗。

3、r>　　6.體內生物學分布實驗。
　　①正常小鼠的體內生物學分布。
　?、诤闪鍪蟮捏w內生物學分布。
　　7.荷瘤鼠的Micro-PET顯像。
　　8.統(tǒng)計學分析。
　　采用統(tǒng)計軟件SPSS20.0進行分析數據。統(tǒng)計結果用均數±標準差表示，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.標記前體NOTA-DGL及NOTA-DGL-PEG-RGDyC的合成表征。
　?、偻ㄟ^核磁氫譜證明PEG

4、及RGDyC成功連接到DGL上，得到DGL-PEG-RGDyC。
　?、谕ㄟ^紫外吸光度檢測證明NOTA-NHS成功連接到DGL上得到標記前體NOTA-DGL及NOTA-DGL-PEG-RGDyC。
　　2.放射性標記及質量控制。顯像劑可在15min內可制得，放化產率在50％~70%之間，分離純化后其放化純度均＞98%。pH值介于4.0～4.2之間為無色、透明、澄清的溶液，無其他重金屬污染。
　　3.脂水分配系數測定。<

5、br>　　經測定68Ga-NOTA-DGL的LogP=-1.62，68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC的LogP=-3.037，表明兩種納米分子探針均呈水溶性。
　　4.體外穩(wěn)定性。68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC分別在0.1M PBS及小牛血清中在37℃下孵育至120min后放化純均＞95%，說明兩種納米分子探針的體外穩(wěn)定性良好，比活度達30GBq/μmol。
　　5.細

6、胞攝取及洗脫實驗。
　?、偌毎疵搶嶒灐549及U87MG細胞能快速、高效地結合68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC，其對兩種細胞的結合力隨時間延長進一步增強，在孵育至2h時達到高峰。
　?、诩毎疵搶嶒灐?8Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC在兩種細胞中均表現(xiàn)為隨時間的延長緩慢下降，且在2h末仍有顯像劑滯留。
　　6.體內生物學分布。

7、　?、僬Ｐ∈蟮捏w內生物學分布。68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC在血液中清除速度較快，放射性攝取主要分布在肝臟和脾臟，其他主要臟器放射性攝取較少。
　　②荷瘤鼠的體內生物學分布。分別注射68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC1小時后， U87MG腫瘤組織的攝取值分別為（0.19±0.02）%ID/g和（0.27±0.09）%ID/g，低于其他主要臟器組織

8、。
　　7.荷瘤鼠的Micro-PET顯像。
　　經尾靜脈分別注射68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC后，放射性攝取均主要分布在肝臟，瘤結節(jié)未見明顯攝取。
　　結論：通過對NOTA-DGL及NOTA-DGL-PEG-RGDyC的68Ga標記證明，此種標記方法簡單、快速，且放化產率較高。然而68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC在腫瘤組織的攝取及顯