高糖環(huán)境對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞壞死性凋亡及IL-6表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過體外實驗，觀察高糖環(huán)境下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）中的RIP1、RIP3和IL-6表達(dá)情況，探討壞死性凋亡對HUVECs損傷的作用及機(jī)制。
　　方法：通過對 HUVECs的體外培養(yǎng)，采用免疫熒光法測定 HUVECs的標(biāo)記性抗原（凝血因子VIII）表達(dá)情況來進(jìn)行細(xì)胞鑒定，根據(jù)不同干預(yù)條件，隨機(jī)分成三組：正常組（葡萄糖含量為5.5mmol/L），高糖組（葡萄糖含量為30mmol/L），甘露醇組（葡萄糖含量為5.5mmo

2、l/L+甘露醇含量為24.5mmol/L），采用 real-time PCR檢測RIP1、RIP3、IL-6的mRNA表達(dá)情況，采用免疫細(xì)胞化學(xué)與蛋白印跡法（WB）檢測RIP1、RIP3、IL-6的蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.免疫熒光：HUVECs可表達(dá)凝血因子VIII，且主要表達(dá)于細(xì)胞漿中，細(xì)胞鑒定為HUVECs。2.RT-PCR：高糖刺激HUVECs后，RIP1、RIP3、IL-6的mRNA表達(dá)量明顯增加，均高于正常組與甘露

3、醇組（P＜0.05），而在正常組與甘露醇組之間上述各指標(biāo)表達(dá)無差別（P＞0.05）。高糖組IL-6與RIP1、RIP3 mRNA的相對表達(dá)量均呈顯著正相關(guān)性（分別為r=0.961, P<0.001;r=0.801, P=0.010）。3.免疫細(xì)胞化學(xué)：RIP1、RIP3、IL-6主要在HUVECs的細(xì)胞漿中表達(dá)，高糖刺激HUVECs后，RIP1、RIP3、IL-6的蛋白表達(dá)量明顯增加，均高于正常組與甘露醇組（P＜0.05），而在正常組與

4、甘露醇組之間上述各指標(biāo)表達(dá)無差別（P＞0.05）。高糖組IL-6與RIP1、RIP3的IOD值均呈顯著正相關(guān)性（分別為r=0.755, P=0.019;r=0.810, P=0.008）。4.蛋白印跡法（Western Blot）：高糖刺激HUVECs后，RIP1、RIP3、IL-6的蛋白表達(dá)量顯著增長，均高于正常組與甘露醇組（P＜0.05），而在正常組與甘露醇組之間上述各指標(biāo)表達(dá)無差別（P＞0.05）。高糖組IL-6與RIP1、RIP