高糖對血管內(nèi)皮細胞凋亡的影響及NO的保護作用.pdf

1、目的:
　　 觀察一氧化氮對不同糖濃度下培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡的影響，探討一氧化氮對糖尿病血管病變的影響和可能機制。
　　 方法:
　　 根據(jù)培養(yǎng)液中葡萄糖濃度不同分為四組：正糖11.1mmol／L組；中糖16.7mmol／L組；高糖22.2mmol/L組和極高糖33.3mmol／L組。人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)在上述四組

2、培養(yǎng)液中培養(yǎng)48小時，然后分別在各組中加入（干預組）或不加入（未干預組）一氧化氮供體---硝普鈉(Sodium Nitroprusside，SNP)，繼續(xù)培養(yǎng)24小時，應用Annexin V／PI雙染流式細胞儀檢測細胞凋亡率，應用RT-PCR檢測各組細胞硫氧還蛋白相互作用蛋白(Thioredoxin-interacting Protein，Txnip)mRNA的表達。
　　 結(jié)果:
　　 1.Annexin V／PI雙染

3、流式細胞儀檢測細胞凋亡率為：（1）未干預組：測得細胞凋亡率分別為：
　　 中糖組較正糖組增加29.76％((16.57±1.91)％vs(12.77±1.54)％)(p<0.05)。
　　 高糖組較正糖組增加56.38％((19.97±1.81)％vs(12.77±1.54)％)(p<0.05)。
　　 極高糖組較正糖組增加94.75％((24.87±1.75)％vs(12.77±1.54)％)(p<0.05)。

4、
　　 且極高糖組凋亡率高于中糖組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；高糖組與中糖組，極高糖組與高糖組比較，其凋亡率增加，但差異均無統(tǒng)計學意義(p>O.05)（2）干預組：測得干預組細胞凋亡率分別為：
　　 正糖組:干預組較未干預組下降55.13％((5.73±1.22)％vs(12.77±1.54)％)(p<0.05)。
　　 中糖組：干預組較未干預組下降38.26％((10.23±1.48)％vs(16.57

5、±1.91)％)(p<0.05)。
　　 高糖組：干預組較未干預組下降32.55％((13.47±1.78)％vs(19.97±1.81)％)(p<0.05)。
　　 極高糖組：干預組較未干預組下降52.15％((11.90±1.35)％vs(24.87±1.75)％)(p<0.05)。
　　 在各組糖濃度中干預組細胞凋亡率均低于未干預組(p<0.05)。
　　 2.RT-PCR檢測Txnip mRNA的

6、表達量為：（1）未干預組：測得細胞Txnip mRNA的表達分別為：
　　 中糖組較正糖組增加25.00％(0.85±0.006vs0.68±0.009)(p<0.05)。
　　 高糖組較正糖組增加30.88％(0.89±0.005vs0.68±0.009)(p<0.05)。
　　 極高糖組較正糖組增加35.29％(0.92±0.002vs0.68±0.009)(p<0.05)。
　　 且極高糖組Txni

7、p mRNA表達量高于中糖組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；高糖組與中糖組，極高糖組與高糖組比較，其Txnip mRNA表達量增加，但差異均無統(tǒng)計學意義(p>O.05)。
　　 （2）干預組：測得干預組細胞Txnip mRNA的表達分別為：
　　 正糖組：干預組較未干預組下降39.71％(0.41±0.013vs0.68±0.009)(p<0.05)。
　　 中糖組：干預組較未干預組下降16.47％(0.71

8、±0.008vs0.85±0.006)(p<0.05)。
　　 高糖組：干預組較未干預組下降12.36％(0.78±0.005vs0.89±0.005)(p<0.05)。
　　 極高糖組：干預組較未干預組下降10.87％(0.82±0.001vs0.92±0.002)(p<0.05)。
　　 在各組糖濃度中干預組細胞Txnip mRNA表達量均低于未干預組(p<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 隨