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1、目的與背景:腦缺血是我國引起高死亡率和高致殘率的常見疾病。近年來已有大量研究證明促進(jìn)神經(jīng)發(fā)生有助于腦梗死后功能恢復(fù),故神經(jīng)發(fā)生是腦梗死后的一個(gè)有效治療靶點(diǎn)。在正常成年哺乳動(dòng)物中,大腦側(cè)腦室下區(qū)(SVZ)和海馬齒狀回(SGZ)是神經(jīng)發(fā)生的主要區(qū)域。有研究顯示豐富環(huán)境能促進(jìn)腦梗死后的神經(jīng)發(fā)生,并有助于腦損傷后的功能恢復(fù)。最近有研究發(fā)現(xiàn)各種神經(jīng)活動(dòng)如電刺激、運(yùn)動(dòng)鍛煉等可以誘導(dǎo)生長(zhǎng)抑制與DNA損傷修復(fù)基因b(Gadd45b)在小鼠的海馬中表達(dá),
2、并提出Gadd45b在成年小鼠海馬的神經(jīng)活動(dòng)引起的神經(jīng)發(fā)生中必不可少。本研究中,我們檢驗(yàn)Gadd45b在腦梗死后側(cè)腦室下區(qū)的神經(jīng)發(fā)生中的作用,并進(jìn)一步探討腦梗后豐富環(huán)境刺激引導(dǎo)的神經(jīng)發(fā)生是否與Gadd45b有關(guān)。
方法:本研究采用成年健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為缺血對(duì)照組(單純MCAO)、病毒干預(yù)組(MCAO+病毒干擾)、空白病毒組(MCAO+空白病毒)、豐富環(huán)境組(MCAO+豐富環(huán)境刺激)、豐富環(huán)境+病毒組(MCAO+豐富環(huán)境刺
3、激+病毒干擾)。采用線栓法建立大腦中動(dòng)脈阻塞模型(MCAO),90min后予以再灌注。建模前7天通過RNA干擾技術(shù)抑制大鼠的Gadd45b表達(dá)。通過免疫熒光染色Gadd45b+/NeuN+、Gadd45b+/GFAP+、Gadd45b+/DCX+、Gadd45b+/Nestin+檢測(cè)腦梗死后Gadd45b在梗死周圍及側(cè)腦室下區(qū)的定位分布;采用免疫熒光染色和Edu染色標(biāo)記Edu+單標(biāo)、Edu+/DCX+、Edu+/MAP2+、Edu+/G
4、FAP+檢測(cè)腦梗死后細(xì)胞的增殖及分化的變化;同時(shí)采用Western Blot、QPCR檢測(cè)Gadd45b的表達(dá),用Western Blot、免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)BDNF的表達(dá)。
結(jié)果:
(1) Gadd45b的定位分布結(jié)果:在梗死區(qū)周圍,Gadd45b在NeuN免疫陽性細(xì)胞上有表達(dá),而與GFAP無共表達(dá);在側(cè)腦室下區(qū)中,Gadd45b在Nestin免疫陽性的C型細(xì)胞中有表達(dá);
(2)側(cè)腦室下區(qū)細(xì)胞增殖變化結(jié)
5、果:病毒干預(yù)組明顯少于缺血對(duì)照組,豐富環(huán)境組明顯多于缺血對(duì)照組,豐富環(huán)境+病毒組與缺血對(duì)照組及空白病毒組無明顯差異;
(3)梗死周圍細(xì)胞分化變化結(jié)果:病毒干預(yù)組明顯少于缺血對(duì)照組,豐富環(huán)境組明顯多于缺血對(duì)照組,豐富環(huán)境+病毒組與缺血對(duì)照組及空白病毒組無明顯差異;
(4)Gadd45b和BDNF的表達(dá)變化結(jié)果:病毒干預(yù)組明顯低于缺血對(duì)照組,豐富環(huán)境組明顯高于缺血對(duì)照組,豐富環(huán)境+病毒組與缺血對(duì)照組及空白病毒組無明顯差異
6、。
結(jié)論:通過RNA干擾抑制Gadd45b的表達(dá)后,腦梗死后側(cè)腦室下區(qū)的細(xì)胞增殖和梗死周圍的神經(jīng)元分化明顯減少,同時(shí)BDNF的表達(dá)也明顯下調(diào),提示Gadd45b在腦梗死后的側(cè)腦室下區(qū)神經(jīng)發(fā)生中不可或缺,且Gadd45b可能通過調(diào)控BDNF的表達(dá)參與神經(jīng)發(fā)生;腦梗死后給予豐富環(huán)境刺激可以上調(diào)Gadd45b和BDNF的表達(dá),并促進(jìn)側(cè)腦室下區(qū)的神經(jīng)發(fā)生;給予RNA干擾和豐富環(huán)境刺激聯(lián)合干預(yù)的大鼠側(cè)腦室下區(qū)神經(jīng)發(fā)生與缺血對(duì)照組無明顯差
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