側腦室注射P63抗體對大鼠腦缺血后P63和P53表達及神經(jīng)元凋亡的影響.pdf

1、目的:觀察側腦室注射P63抗體對大鼠全腦缺血后海馬CA1區(qū)P63和P53表達及神經(jīng)元凋亡的影響,探討p63在腦缺血缺氧后P63和P53表達及神經(jīng)元凋亡中的作用,為腦缺血缺氧后神經(jīng)元凋亡的防治提供新的理論依據(jù)。
　　方法:雄性SD大鼠75只,按隨機數(shù)字法隨機等分為三組:假手術(A)組、缺血(B)組、抗體(C)組。神經(jīng)行為學評分大于16分的大鼠納入本實驗研究。假手術(A)組行側腦室注射人工腦脊液但不行全腦缺血處理;缺血(B)組行側腦室

2、注射人工腦脊液及全腦缺血處理;抗體(C)組行側腦室注射P63抗體及全腦缺血處理。三組實驗大鼠分別于術后6h、12h、24h、48h、72h行神經(jīng)行為學評分。大鼠神經(jīng)行為學評分后行2％戊巴比妥鈉麻醉,4%多聚甲醛灌注并取腦,腦組織切片分別行HE染色和TUNEL染色以測定海馬CA1區(qū)神經(jīng)元密度和神經(jīng)元凋亡指數(shù);免疫組化檢測海馬CA1區(qū)P63和P53的表達,并對兩種蛋白的表達水平作半定量分析。
　　結果:1.動物模型的構建:本實驗中有7

3、只大鼠死亡:5只死于術中呼吸心跳驟停,2只于術后未到取材時間點而死亡,均予以補充,共有75只大鼠納入統(tǒng)計分析。
　　2.神經(jīng)行為學評分:75只大鼠術前的神經(jīng)行為學評分均正常(16～20分)。A組大鼠術后各時點的神經(jīng)行為學評分均在正常范圍。B組和C組大鼠在術后各時點的神經(jīng)行為學評分顯著低于術前(p<0.01),術后各個時點評分以72h最低(p<0.05)。而C組大鼠術后6h評分與B組無差異,其后各個時點的神經(jīng)行為學評分顯著高于B組(

4、p<0.01)。
　　3.神經(jīng)元密度:A組大鼠術后各時點海馬CA1區(qū)神經(jīng)元密度無明顯差異(p>0.05)。B組和C組大鼠與A組比較,術后6h、12h、24h、48h、72h神經(jīng)元密度明顯降低(p<0.05),其中術后72h神經(jīng)元密度最低(p<0.05)。而C組大鼠術后各時點神經(jīng)元密度明顯高于B組(p<0.05)。
　　4.神經(jīng)元凋亡:A組大鼠術后各時點海馬CA1區(qū)僅見極少量凋亡細胞。而B組和C組大鼠與A組比較,術后6h、12

5、h、24h、48h、72h海馬CA1區(qū)凋亡細胞指數(shù)顯著升高(p<0.01),其中術后48h凋亡指數(shù)最高(p<0.05)。而C組大鼠海馬CA1區(qū)凋亡細胞指數(shù)明顯小于B組(p<0.05)。
　　5.P63和P53的表達:A組大鼠術后各時點海馬CA1區(qū)僅見少量P63和P53表達。B組和C組大鼠與A組比較,術后各時點海馬CA1區(qū)P63和P53表達顯著增多(p<0.01)。P63在術后6h表達開始增加,于術后48h時達峰值,隨后表達降低。P

6、53在術后6h表達開始增多,24h時表達達高峰,隨后表達逐漸降低。B組和C組大鼠比較,術后各時點P53表達無明顯差異(p>0.05),但C組大鼠P63表達明顯低于B組(p<0.05)。
　　6.相關分析:大鼠腦缺血再灌注損傷后海馬CA1區(qū)P63與P53的表達呈正相關(r=0.592,p<0.01);P63的表達與腦缺血后神經(jīng)元凋亡呈正相關(r=0.853,p<0.01);P53的表達與腦缺血后神經(jīng)元凋亡呈正相關(r=0.852,p