腦室內(nèi)低溫對(duì)兔腦缺血后神經(jīng)細(xì)胞凋亡及p53蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的: 在繼發(fā)于蛛網(wǎng)膜下腔出血的動(dòng)脈血管痙攣中、腦外傷中和神經(jīng)血管操作過程暫時(shí)夾閉動(dòng)脈中經(jīng)常出現(xiàn)腦缺血。盡管嘗試了多種方法，但是腦中風(fēng)的治療結(jié)果仍難以令人滿意。腦損害的嚴(yán)重性取決于缺血持續(xù)時(shí)間、閉塞的血管和側(cè)支循環(huán)情況。已經(jīng)進(jìn)行的幾個(gè)研究主要集中于更好的理解缺血-再灌注的病理生理過程和提高缺血-再灌注情況下的腦保護(hù)。在人類，這樣的研究通常是通過臨床評(píng)估和影像學(xué)檢查來進(jìn)行的，不能早期發(fā)現(xiàn)繼發(fā)于缺血-再灌注的細(xì)胞現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀懈?/p>

2、地控制生理變量的優(yōu)勢(shì)，并允許使用更精確的方法來測(cè)量和評(píng)估結(jié)果。實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷闹饕秉c(diǎn)是很難將實(shí)驗(yàn)室結(jié)果應(yīng)用到人類。 在用于腦保護(hù)的方法中，低溫療法是很突出的。盡管低溫的作用機(jī)制尚不完全清楚，但應(yīng)該是多因素的。然而，實(shí)驗(yàn)研究證明，深低溫可能產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。而輕到中度低溫有神經(jīng)保護(hù)作用，但不產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。 在目前的抗凋亡治療中，亞低溫治療應(yīng)用比較廣泛。亞低溫腦保護(hù)的機(jī)制包括：1、降低腦代謝，維持腦血流量，平衡能量供應(yīng)。2、

3、保護(hù)血腦屏障，減輕血管源性腦水腫。3、抑制神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。4、減少細(xì)胞內(nèi)Ca2+的堆積。5、減少自由基與脂類氧化的連鎖。6、減輕腦組織蛋白質(zhì)破壞，促進(jìn)腦結(jié)構(gòu)和功能的恢復(fù)。7、減少其他內(nèi)源性毒性產(chǎn)物。有研究表明亞低溫具有減輕腦缺血患者腦水腫，降低顱內(nèi)壓，防止細(xì)胞凋亡的作用。 腦室內(nèi)低溫(IVH)是一種新的降溫途徑，作為一種選擇性腦部低溫(SBC)方法，其應(yīng)用于急性腦缺血(ACI)動(dòng)物模型的研究尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)對(duì)家兔急性腦缺血模型

4、進(jìn)行腦室內(nèi)低溫保護(hù)，通過觀察動(dòng)物行為和對(duì)缺血灶周圍腦組織凋亡細(xì)胞數(shù)和p53蛋白表達(dá)的觀察，來探討腦室內(nèi)低溫對(duì)家兔急性腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷蛲龊蚿53蛋白表達(dá)的影響。 兔是一個(gè)合適的用于研究暫時(shí)性、局灶性缺血的模型，其缺血狀態(tài)與人類相似。沒有找到證明低溫對(duì)兔局灶性缺血有可能的神經(jīng)保護(hù)作用的研究。 材料與方法: 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用雄性家兔24只，兔齡4～6個(gè)月，體重(2.9±0.3)kg。家兔24只隨機(jī)分成常溫組和

5、亞低溫組。 2、麻醉 動(dòng)物實(shí)行全麻，實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食12小時(shí)，不禁水。應(yīng)用耳緣靜脈注射烏拉坦進(jìn)行麻醉。維持麻醉時(shí)采用半量肌肉注射。 3、局部腦缺血模型的建立 采用線栓法制作兔大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)局部腦缺血模型，缺血時(shí)間24小時(shí)。 4、腦室內(nèi)低溫模型的建立 用雙腔靜脈微導(dǎo)管穿刺腦室，固定導(dǎo)管。導(dǎo)管一端為液體入口，另一端為腦室內(nèi)液體流出口。等溫組輸入等溫(38℃)等滲鹽水，低溫組輸入冷卻的

6、20℃等滲鹽水，緩慢滴注，維持出入量平衡。 5、術(shù)后動(dòng)物行為觀察、TTC染色、TUNEL染色及p53檢測(cè) 術(shù)后縫合切口皮膚，動(dòng)物置于室溫飼養(yǎng)。術(shù)后24小時(shí)觀察其肢體運(yùn)動(dòng)情況，此后過量麻醉下處死。迅速開顱取腦，4％多聚甲醛固定。腦組織固定72小時(shí)后，洗滌，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟，常規(guī)石蠟包埋，制成厚7μm的冰凍切片，TTC染色、TUNEL染色和p53免疫組化染色均按試劑盒提供的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行。 6、計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)

7、 用顯微照相系統(tǒng)拍照，每個(gè)標(biāo)本在高倍鏡(400倍)下隨機(jī)觀察5個(gè)不重疊視野，計(jì)算平均每個(gè)高倍視野的陽性細(xì)胞數(shù)。 7、數(shù)據(jù)分析 將數(shù)據(jù)輸入SPSS12.0軟件，同一指標(biāo)的組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1、動(dòng)物行為觀察常溫組中有8只動(dòng)物出現(xiàn)右側(cè)肢體完全癱瘓，3只可以爬行，1只可以跳躍。低溫組中有7只可以爬行，3只可以跳躍，2只出現(xiàn)右側(cè)肢體完全癱瘓。與常溫組比較，亞低溫組動(dòng)物肢

8、體偏癱程度輕。 2、腦組織細(xì)胞凋亡及p53表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果TUNEL染色陽性細(xì)胞核中呈現(xiàn)有棕黃色顆粒，p53蛋白染色細(xì)胞漿著色呈棕黃色。與常溫組比較，亞低溫組動(dòng)物缺血周圍神經(jīng)細(xì)胞凋亡少，p53蛋白表達(dá)降低。 3、腦梗死體積與常溫組比較，亞低溫組動(dòng)物腦梗死體積小。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析低溫組的腦梗塞體積、TUNEL染色陽性細(xì)胞數(shù)和p53染色陽性細(xì)胞數(shù)明顯低于常溫組，有顯著性差異。 結(jié)論: 對(duì)家兔急性腦缺血模