REV感染對雞胚成纖維細胞凋亡及P53表達的影響.pdf

1、禽網狀內皮組織增生病(reticuloendotheliosis，RE)是由禽網狀內皮組織增生病病毒(reticuloendotheliosis virus，REV)引起的一種禽免疫抑制和腫瘤性疾病，REV主要引起病禽的免疫抑制、網狀內皮細胞增生、淋巴瘤的生成等。細胞凋亡是一種程序性細胞死亡過程，對內環(huán)境穩(wěn)態(tài)的維持起重要作用。p53基因不但與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關，也與細胞凋亡的產生密切相關。目前，對于RE的流行病學、病原學、特異性診斷、尤

2、其是病原的分子生物學特性等進行較系統(tǒng)的研究，并且取得一定的成果，但是對于REV引起病禽免疫抑制癥狀、特別是REV的免疫致病機制依然缺乏全面深入的了解。為從細胞凋亡角度闡述REV引起免疫抑制的機制，探究細胞凋亡與REV致病的關系，本項研究以SPF雞胚成纖維細胞(CEF)為研究對象，實驗分為空白對照組（C組）和REV感染組（I組），其中，REV感染組運用100TCID50濃度的病毒感作雞胚成纖維細胞2h，棄掉感作液后補加含有2％胎牛血清的D

3、MEM維持細胞生長，而空白對照組用不含病毒的DMEM作用2h后，棄掉DMEM后補加含有2％胎牛血清的DMEM維持細胞生長，在成功制備兔抗雞P53多克隆抗體的基礎上，分別應用流式細胞術、實時熒光定量PCR（RT-PCR）、Western Blot等方法，通過對C組和I組雞胚成纖維細胞凋亡數量、p53 mRNA表達及P53蛋白表達量變化的檢測，較全面系統(tǒng)的研究了REV感染SPF雞胚成纖維細胞后，不同被檢時間點上述被檢指標的動態(tài)變化，為深入研

4、究REV引起細胞凋亡的分子機制提供理論參考依據;同時，也為從細胞凋亡角度研究REV引起免疫抑制的機制提供參考。主要研究結果如下:
　　1.成功制備了兔抗雞P53多克隆抗體，該抗體的ELISA效價為219，經Western Blot檢測，其特異性強。
　　2.REV感染SPF雞胚成纖維細胞后72 h內，其SPF雞胚成纖維細胞凋亡數量均比未感染RE病毒的對照雞胚不同程度升高，其中，病毒感作后72 h時，病毒感染組CEF與對照組C

5、EF差異顯著(P＜0.05)。
　　3.REV感染SPF雞胚成纖維細胞后6-72 h，與未感染REV的對照組相比較RE病毒感染組p53 mRNA表達量均不同程度升高，其中，病毒感染后48 h和72 h時，病毒感染組p53mRNA表達較對照組明顯增加(P＜0.05)。
　　4.REV感染SPF雞胚成纖維細胞后6-72 h，RE病毒感染組P53蛋白量均比對照組不同程度升高。
　　根據以上試驗結果發(fā)現:REV能夠引起SPF雞