外源性bFGF對壓瘡深部組織損傷肌組織的修復作用及機制的探討.pdf

1、壓瘡是臨床常見的嚴重并發(fā)癥，其中惡性壓瘡是壓瘡分類中最為嚴重的類型。臨床表現(xiàn)為受壓局部深部組織損傷，皮膚表面完整而皮下組織損傷嚴重，具有隱匿性、難愈性等特點。因此，早期促進深部組織損傷修復是壓瘡防治的重點。堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)作為創(chuàng)傷修復的重要生長因子的研究已較成熟，本研究試圖通過壓瘡深部組織損傷動物模型觀察外源性bFGF對其深部組織損傷的修復作用，初步探討促肌肉修復的可能機制，為臨床壓瘡的防治提供科學依據(jù)。
　　目

2、的：
　　通過觀察外源性堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)對大鼠壓瘡深部組織損傷(DTI)后的肌肉修復的作用，并探討相關(guān)機制，為其在臨床隱匿性壓瘡深部組織損傷修復中的應用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　采用壓瘡深部組織損傷(DTI)大鼠模型，將48只雄性SD大鼠隨機分為6組(n=8)，即正常對照組，損傷對照組及實驗組(4d、7d、14d、21d)。損傷對照組即造模完成后的第0天。實驗組在大鼠造模成功后分別于左側(cè)局部皮下

3、肌膜外隔天注射rhbFGF（10ug/0.1ml），右側(cè)注射等體積的生理鹽水作為對照，于損傷后的第4d，7d，14d，21d對受壓組織中心進行取材，采集標本后給予安樂死。肉眼觀察相應時間點受壓部位創(chuàng)面愈合情況并于各時間點對其創(chuàng)面進行拍照評估。HE病理染色觀察骨骼肌組織形態(tài)學變化。Masson染色法分析肌肉組織纖維化情況。運用SABC免疫組織化學法于光鏡下觀察CD31、PCNA的表達變化。免疫熒光檢測不同修復時間點生肌調(diào)節(jié)因子肌生成素(m

4、yogenin)及CD31蛋白表達情況。Western blotting檢測局部肌組織肌球蛋白重鏈(MyHC)及通路相關(guān)蛋白Akt，mTOR的磷酸化水平在不同時間點的動態(tài)變化。
　　結(jié)果：
　　1.創(chuàng)面愈合情況:造模結(jié)束后，bFGF組和NS組受壓創(chuàng)面無明顯區(qū)別，之后隨著修復時間的延長，創(chuàng)面明顯小于NS組(P＜0.05)。
　　2.形態(tài)學觀察:HE結(jié)果顯示實驗組在各觀察時間點，左側(cè)損傷處給藥組骨骼肌的修復情況均優(yōu)于右側(cè)對

5、照組，肌細胞腫脹，炎癥浸潤，結(jié)構(gòu)紊亂等病理損傷現(xiàn)象均較右側(cè)減輕，肌細胞增殖數(shù)目增多。
　　3.Masson染色觀察顯示造模完成后，肌纖維排列紊亂、疏松，間隙較大。根據(jù)修復時間的不同，各組局部受壓肌組織出現(xiàn)不同程度的病理纖維化改變。同時間點，bFGF組與NS組相比，肌組織病理纖維化生成面積減少。
　　4.免疫組化結(jié)果顯示:PCNA呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，光鏡下各組于相應天數(shù)的NS對照組相比，各bFGF給藥組單位面積內(nèi)蛋白表達陽

6、性的顆粒數(shù)量均多于對照組（P＜0.05），bFGF組在第7d達到高峰，14d組表達開始下降，21d組表達明顯減少;損傷對照組無CD31表達，與各組內(nèi)對照組相比，7d組、14d組，bFGF給藥后均可見CD31陽性顆粒且數(shù)目較NS對照組多(P＜0.05)?；謴秃笃诘牡?1d新生血管較少。
　　5.通過免疫熒光雙標方法檢測CD31及myogenin蛋白。壓瘡組織中CD31陽性顆粒主要分布在新生血管周圍，同免疫組化結(jié)果一致。myogeni

7、n蛋白主要表達在細胞核內(nèi)，單位面積內(nèi)的陽性顆粒數(shù)分析顯示bFGF組7d及14d myogenin蛋白表達達到高峰，與NS對照組比較差異顯著（P＜0.01）。
　　6.Western blotting檢測顯示隨修復時間的延長，MyHC蛋白水平逐漸增高，各時間點bFGF組蛋白表達均較NS組增多（P＜0.05），bFGF組21d的蛋白含量與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05); Western Blot法檢測相應肌組織myog

8、enin蛋白表達情況可得到與其免疫熒光相同的結(jié)果，bFGF干預后，成肌素含量表達逐漸增強，于第7d達到高峰，之后逐漸下降，而NS對照組高峰期滯后，各組結(jié)果分析同bFGF組差異顯著（P＜0.05）。
　　7.Western blotting檢測PI3K/Akt/mTOR通路相關(guān)蛋白，結(jié)果以目的蛋白p-Akt與Akt灰度比值，p-mTOR與mTOR灰度比值表示。造模完成后的Akt及mTOR磷酸化水平均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，于第7d，

9、14d，21d發(fā)生改變，bFGF組磷酸化水平均顯著高于對照組(P＜0.05)，尤其在第7d蛋白表達量達到高峰。
　　結(jié)論：
　　1.外源性bFGF能通過促進修復相關(guān)細胞的增殖，改善損傷局部組織的微循環(huán)情況，從而減少深部肌組織纖維化，有效促進DTI肌組織的修復。
　　2.bFGF可調(diào)節(jié)損傷區(qū)域成肌素的表達，促進肌肉修復，達到改善肌肉結(jié)構(gòu)的目的。
　　3.PI3K/Akt/mTOR通路相關(guān)蛋白磷酸化表達的增強，說明外