外泌體對組織修復(fù)的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　外泌體（Exosomes，Exos）是一種由細(xì)胞分泌，與其來源細(xì)胞在促進(jìn)組織再生的功能上相似的納米級囊泡，并具有跨物種傳遞信號的能力。源自滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞（synovial mesenchymal stem cells，SMSCs)的Exos（SMSC-Exos）和富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）的Exos（PRP-Exos）在預(yù)防股骨頭壞死（osteonecrosis of femor

2、al heal，ONFH），以及PRP-Exos促進(jìn)慢性創(chuàng)面的修復(fù)等方面的應(yīng)用目前尚未見報道。
　　目的：
　　探討SMSC-Exos及PRP-Exos能否用于預(yù)防ONFH，PRP-Exos能否促進(jìn)慢性創(chuàng)面修復(fù)，以及它們發(fā)揮功能的分子機(jī)制。
　　方法：
　　分離培養(yǎng)SMSCs和提取PRP，進(jìn)一步提取、純化和鑒定 SMSC-Exos和PRP-Exos，體外實驗觀察Exos對骨髓細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞（endothelial

3、 cells，ECs）和成纖維細(xì)胞的增殖、遷移、功能及凋亡等的影響，以及對成骨、成血管和凋亡等重要信號通路的影響；體內(nèi)實驗觀察Exos對ONFH的預(yù)防作用和對慢性創(chuàng)面修復(fù)的促進(jìn)作用。
　　結(jié)果：
　?。?）成功分離SMSCs和PRP，提取SMSC-Exos和PRP-Exos，并建立動物實驗?zāi)Ｐ停?br>　?。?）通過透射電鏡、粒徑分布及Exos標(biāo)志物的檢測證明SMSC-Exos和PRP-Exos的提取成功；
　?。?）

4、SMSC-Exos和PRP-Exos可預(yù)防ONFH,而PRP-Exos可促進(jìn)慢性創(chuàng)面修復(fù)：體外，通過DiL標(biāo)記，觀察到Exos可以被細(xì)胞攝取和整合；細(xì)胞增殖實驗表明Exos可促進(jìn)細(xì)胞增殖，并阻斷激素導(dǎo)致的增殖抑制；通過Annexin V和caspase-3檢測，發(fā)現(xiàn)Exos可阻斷激素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡；通過血管生成實驗發(fā)現(xiàn)Exos可促進(jìn)ECs成管，并阻斷激素誘導(dǎo)的成管功能抑制；成骨誘導(dǎo)實驗提示PRP-Exos可阻斷激素誘導(dǎo)的細(xì)胞成骨功能抑制

5、。體內(nèi)，通過組織切片Ki67和TUNEL染色觀察股骨頭中細(xì)胞增殖和凋亡情況；組織學(xué)和影像學(xué)檢測觀察股骨頭的形態(tài)和病理變化和血管數(shù)量。
　?。?）PRP-Exos預(yù)防ONFH和促進(jìn)慢性創(chuàng)面修復(fù)的機(jī)制：檢測Akt和Erk磷酸化水平，發(fā)現(xiàn)PRP-Exos激活A(yù)kt和Erk促血管新生；檢測Runx2，Type I Collagen和β-catenin蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)PRP-Exos通過穩(wěn)定β-catenin阻斷激素引起的抑成骨作用；通過