大鼠骨骼肌缺血再灌注損傷遠(yuǎn)隔肺組織中組織間粘附分子(ICAM-1)的表達(dá)及作用機(jī)制探討.pdf

1、目的:通過(guò)觀察大鼠骨骼肌缺血再灌注損傷中遠(yuǎn)隔肺臟組織間粘附分子的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討缺血再灌注損傷致遠(yuǎn)隔臟器的損傷的作用機(jī)制，為臨床治療機(jī)預(yù)防提供理論依據(jù)。
　　 缺血再灌注損傷（ischemiareperfusioninjury,IRI）最先由McCord于1985年首次提出，是指各種原因造成的局部組織器官的缺血，常常使組織細(xì)胞發(fā)生缺血性損傷(ischemiainjury)，在一定條件下恢復(fù)血液再灌注后，細(xì)胞功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)

2、破壞不但未減輕反而損傷進(jìn)一步加重的現(xiàn)象。臨床常見(jiàn)由斷肢再植、運(yùn)動(dòng)損傷及創(chuàng)傷、動(dòng)脈栓塞及血栓形成、應(yīng)用止血帶時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等引起的肢體缺血，長(zhǎng)期以來(lái)，人們關(guān)注于盡早恢復(fù)組織血液供應(yīng)，卻并未注意到當(dāng)缺血組織恢復(fù)血液供應(yīng)以后，組織損傷仍然存在且進(jìn)一步加劇。在臨床工作當(dāng)中，骨骼肌缺血再灌注損傷非常常見(jiàn)，往往引起肌肉、肢體組織細(xì)胞壞死和感覺(jué)及運(yùn)動(dòng)功能障礙，可導(dǎo)致殘疾，嚴(yán)重者還可對(duì)生命造成威脅。再灌注損傷除了導(dǎo)致缺血組織的二次損傷，還能通過(guò)氧自由基、炎癥

3、因子等物質(zhì)，導(dǎo)致心、肺、肝、腎等遠(yuǎn)隔器官的繼發(fā)損傷，并因此導(dǎo)致相當(dāng)高的致殘率甚至致死率，目前已成為諸如血管外科、創(chuàng)傷科、骨科、急診外科等科室在臨床工作中面臨的現(xiàn)實(shí)問(wèn)題并急需解決。
　　 近年來(lái)，對(duì)于缺血再灌注損傷的發(fā)生及作用機(jī)制，眾多學(xué)者已做了大量的研究，對(duì)于機(jī)制的探討也逐漸深入，隨著研究的進(jìn)一步加深，氧自由基學(xué)說(shuō)、鈣超載、無(wú)復(fù)流現(xiàn)象及中性粒細(xì)胞的作用等逐漸為人們接受。同時(shí)，也發(fā)現(xiàn)眾多炎癥因子及凋亡調(diào)控基因在缺血再灌注損傷中扮演

4、重要的作用，研究層面逐漸由細(xì)胞水平向細(xì)胞器水平進(jìn)展。
　　 缺血再灌注損傷不僅引起局部組織的缺血性損傷，還可通過(guò)各種炎性介質(zhì)的作用引發(fā)遠(yuǎn)隔器官的損傷，遠(yuǎn)隔器官的損傷主要由炎癥反應(yīng)引起，中性粒細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。此過(guò)程需中性粒細(xì)胞聚集、活化和釋放炎性介質(zhì)，其關(guān)鍵為中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞相互黏附，這一過(guò)程由細(xì)胞間粘附分子（ICAM-1）介導(dǎo)，本實(shí)驗(yàn)期望通過(guò)觀察骨骼肌缺血再灌注損傷引發(fā)的遠(yuǎn)隔肺組織中ICAM-1的表達(dá)情況，探討骨

5、骼肌缺血再灌注損傷引發(fā)遠(yuǎn)隔肺損傷是否與ICAM-1有關(guān)。
　　 方法:選擇健康清潔級(jí)成年SD大鼠27只，體重150-200g，隨機(jī)分成兩組:①對(duì)照組(n=14):常規(guī)麻醉7小時(shí)后處死取材;②實(shí)驗(yàn)組(n=13)按照1ml/100g腹腔注射3％戊巴比妥鈉常規(guī)麻醉后，阻斷帶阻斷右后肢血流3小時(shí)，松解阻斷再灌注4小時(shí)后取材。取骨骼肌組織采用HE染色，光鏡下觀察組織形態(tài)的改變，取左肺下葉組織行HE染色，光鏡下觀察形態(tài)學(xué)改變，取右肺下葉組織

6、，石蠟切片后免疫組織化學(xué)染色，觀察ICAM-1在肺組織的表達(dá)情況;陽(yáng)性細(xì)胞采用專業(yè)圖像分析軟件Image-ProPlus6.0測(cè)定平均光密度值(MeanDensity)，用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件spss13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為有顯著性差異。
　　 結(jié)果:1.骨骼肌組織HE染色光鏡下觀察對(duì)照組:骨骼肌組織形態(tài)學(xué)正常;實(shí)驗(yàn)組:肌細(xì)胞腫脹明顯，細(xì)胞間隙明顯增寬，間質(zhì)血管擴(kuò)張充血，部分肌纖維溶解、壞死，炎性細(xì)胞浸

7、潤(rùn)明顯。2.肺組織HE染色光鏡下觀察對(duì)照組:肺泡腔較完整，肺泡壁較光滑，肺泡間隔均勻一致，肺泡結(jié)構(gòu)較好;實(shí)驗(yàn)組:肺泡腔完整性差，部分肺泡塌陷，肺泡壁不光滑，可見(jiàn)毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，部分白細(xì)胞附壁，肺泡間隔增寬增厚，大量白細(xì)胞聚集，肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)明顯滲出及出血。3.免疫組織化學(xué)結(jié)果光鏡下觀察可見(jiàn):ICAM-1主要于肺泡上皮細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，表現(xiàn)為棕黃色顆粒，實(shí)驗(yàn)組免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值為(0.1160±0.022)對(duì)照組免疫陽(yáng)性細(xì)