壓瘡組織中iNOS和eNOS及細胞凋亡對其難愈性機制影響的研究.pdf

1、目的：探討壓瘡組織細胞中iNOS和eNOS的表達和細胞凋亡情況及其與壓瘡難愈性的關(guān)系，分析壓瘡難愈性的可能機制。 材料和方法： ①標本的采集及分組：在患者知情同意的情況下取9例患有Ⅲ度壓瘡病人的壓瘡皮膚組織，按壓瘡潰瘍中心基底部組織、潰瘍邊緣組織、正常皮膚組織進行分組對照：正常皮膚組織為Ⅰ組，潰瘍邊緣組織為Ⅱ組，潰瘍中心基底部組織為Ⅲ組。 ②實驗方法與目的：對切片進行HE染色，觀察壓瘡組織所發(fā)生的病理學(xué)變化；對切

2、片進行免疫組織化學(xué)染色（SP法），觀察壓瘡組織內(nèi)iNOS、eNOS的表達情況；DNA原位缺口末端標記法（TUNEL）檢測壓瘡組織中凋亡細胞情況。 ③結(jié)果判定：iNOS、eNOS抗原陽性表達位于細胞漿，細胞漿呈黃色或棕黃色；凋亡細胞陽性表達位于細胞核，細胞核呈黃色或棕黃色。每張切片中隨機選擇5個視野（x400倍率）觀察陽性細胞分布和著色情況，用Image-prol-plus6．0計算機圖像分析技術(shù)檢測陽性細胞表達的強弱。

3、④統(tǒng)計分析：采用SPSS13．0統(tǒng)計軟件：采用單因素方差分析對計量資料進行統(tǒng)計學(xué)處理；變量間關(guān)系用直線相關(guān)分析；數(shù)據(jù)以（x±s）表示；以P<0．05為有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果：iNOS、eNOS在正常皮膚組織、潰瘍邊緣組織、潰瘍基底部組織中的表達： ①正常皮膚組織：iNOS主要在表皮、皮脂腺、毛囊等處表達，正常血管內(nèi)皮細胞很少表達。eNOS在表皮中表達較弱，皮下僅少數(shù)毛細血管的內(nèi)皮細胞有表達； ②潰瘍邊緣皮膚組織：i

4、NOS在表皮表達較正常皮膚表皮弱，皮脂腺、毛囊處表達增強，出現(xiàn)血管內(nèi)皮細胞的表達，真皮層基質(zhì)內(nèi)大量炎癥細胞（單核巨噬細胞為主）表達呈陽性；eNOS在表皮全層細胞均有表達，真皮組織中的各種血管內(nèi)皮細胞均呈陽性表達，其它細胞少見陽性； ③潰瘍中心的基底部：iNOS在肉芽組織中表達呈強陽性，主要表達在各種新生血管內(nèi)皮細胞以及炎癥細胞中。eNOS在成纖維細胞以及肉芽組織中的各種血管內(nèi)皮細胞呈強陽性表達。iNOS、eNOS在潰瘍組織中的表

5、達有如下規(guī)律：潰瘍邊緣組織表達強于正常皮膚組織，潰瘍中心基底部組織強于潰瘍邊緣組織，陽性細胞的積分光密度值各組間兩兩比較差異有顯著性（P值均<0．01）。 凋亡細胞在正常皮膚組織、潰瘍邊緣組織及潰瘍中心組織中的分布情況：壓瘡潰瘍中心組織以及邊緣組織出現(xiàn)了大量的表皮基底層細胞、血管內(nèi)皮細胞、及成纖維細胞的大量凋亡，且潰瘍中心組織中凋亡細胞數(shù)目多于潰瘍邊緣組織，正常皮膚組織細胞凋亡較少（P值均<0．01）。 各組皮下組織中細

6、胞凋亡情況與iNOS和eNOS的表達有明顯相關(guān)關(guān)系（r=0．601，r=0．610）。 結(jié)論： ①潰瘍中心和邊緣組織中，炎癥細胞和血管內(nèi)皮細胞均能見到iNOS的高表達，由血管內(nèi)皮細胞等非炎癥細胞中過表達的iNOS催化產(chǎn)生的大量NO可以導(dǎo)致膠原產(chǎn)生和細胞增殖減少，阻止創(chuàng)面修復(fù)。 ②壓瘡潰瘍中心及邊緣組織中高表達的eNOS導(dǎo)致血管過度擴張致使微血管內(nèi)皮損傷、滲出液增多加重了局部組織水腫，延緩壓瘡創(chuàng)面的愈合。