電針對頸椎病模型大鼠椎間盤細胞凋亡及Wnt-β-catenin信號通路的影響.pdf

1、目的:觀察電針對大鼠頸椎病模型椎間盤細胞凋亡及Wnt/β-catenin信號通路的影響。
　　方法:選擇SPF級SD大鼠(100g±20g)40只，雌雄各半，先讓大鼠適應(yīng)環(huán)境1周，然后將大鼠按隨機數(shù)字表法分為假手術(shù)組10只，造模組30只。假手術(shù)組僅將皮膚切開，不切斷肌肉組織，然后縫合，作為對照;造模組采用動靜力失衡的方法建造大鼠頸椎病模型。造模后常規(guī)飼養(yǎng)3個月，采用甲苯胺藍染色法觀察頸椎間盤組織形態(tài)學(xué)的改變確定造模成功。將造模組大

2、鼠用隨機數(shù)字表分為模型對照組（模型組）、模型電針治療組（電針組）、模型莫比可片對照治療組（莫比可組），每組8只。電針組將大鼠固定于自制大鼠固定器上，針刺“大椎”穴約4mm，在大鼠右耳后取一非經(jīng)非穴點，連接韓氏穴位神經(jīng)刺激儀，刺激參數(shù)為:疏密波，頻率2/100Hz，疏波密波交替，各工作3s，頻率2Hz時脈沖波的波寬為0.6ms，頻率100Hz時脈沖波的波寬為0.2ms，強度以針刺部位輕輕抖動為宜，電流強度約1-2mA。每日治療1次，連續(xù)治

3、療14天為1療程，療程之間間隔2天，共2個療程;莫比可組給予莫比可片灌胃治療，1次/d，灌胃劑量按照《動物實驗方法學(xué)》人與大鼠體表面積的藥物等效劑量換算，每日0.7878 mg/kg灌胃干預(yù)，治療療程與電針組相同;假手術(shù)組和模型組只做固定而不做治療處理，其固定的時間同電針組。治療結(jié)束后取椎間盤，采用DNA斷裂的原位末端標(biāo)記法(Termi-nal-deoxynucleoitidyltransferase mediated nick end

4、 labeling，Tunel)檢測椎間盤細胞凋亡情況，采用免疫組織化學(xué)法檢測椎間盤細胞Wnt、糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthese kinase-3β，GSK-3β)、軸蛋白(Axis Inhibition Protein，Axin)的表達，采用Western blot半定量檢測法檢測椎間盤組織β-catenin蛋白的表達水平。
　　結(jié)果:(1) Tunel法:與假手術(shù)組比較，光鏡下觀察造模組凋亡細胞的陽性表

5、達數(shù)目明顯較多，呈棕色或棕褐色，體積較小，形態(tài)呈濃縮或碎點狀，不規(guī)則，大小不一致。與模型組比較，電針組、莫比可組的凋亡細胞陽性表達數(shù)目明顯減少。
　　(2)甲苯胺藍染色:假手術(shù)組中軟骨終板呈現(xiàn)深藍紫色，且終板厚度較厚，軟骨細胞數(shù)目多，造模組中軟骨終板染色較淡，其軟骨終板的厚度較薄，且軟骨細胞數(shù)目少。
　　(3)免疫組織化學(xué)檢測:與假手術(shù)組比較，造模組中Wnt、GSK-3β、Axin的陽性表達量相對減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P

6、＜0.05）;與模型組比較，電針組、莫比可組Wnt、GSK-3β、Axin蛋白的表達量相對增多，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。
　　(4)Western-blot檢測:與假手術(shù)組比較，造模組的β-catenin陽性表達量相對減少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）;與模型組比較，電針組、莫比可組中β-catenin的陽性表達量相對增多，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:(1)電針能夠有效的抑制大鼠頸椎病動