β片層阻斷肽H102對雙轉(zhuǎn)基因AD小鼠CaM-CaMKⅡ-CREB信號通路的影響.pdf

1、目的：
　　研究β片層阻斷肽H102對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠行為學、腦內(nèi)Aβ1-42蛋白及CaMKⅡ-CREB信號通路相關(guān)蛋白p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、CaM、p-CaMKIIα、p-CaMKIIβ、p-CREB、ATF-1和cleaved caspase3蛋白表達的影響，探討H102對雙轉(zhuǎn)基因AD小鼠腦內(nèi)CaM-CaMKⅡ-CREB信號通路的影響。
　　方法：
　　1、利用隨機

2、數(shù)字表法將雙轉(zhuǎn)基因AD小鼠分為模型組和H102給藥組，并設(shè)同周齡同背景C57BL/6J小鼠為正常對照組。給藥組每日鼻腔給予H102溶液（5.8 mg/kg）5μl，正常對照組和模型組每日鼻腔給予輔料溶液5μl，每日同樣時間給藥1次。連續(xù)給藥4個月后，進行Morris水迷宮實驗檢測雙轉(zhuǎn)基因AD小鼠的空間學習記憶能力的變化。
　　2、Morris水迷宮實驗結(jié)束后，小鼠斷頭處死，在冰上解剖取腦，一半腦組織放入4％多聚甲醛溶液內(nèi)固定，石蠟

3、包埋制作切片，用于免疫組化法檢測腦內(nèi)Aβ1-42、p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、p-CREB和cleaved caspase3蛋白的表達；另一半分離海馬及皮層保存于-80℃，用于 western blot檢測腦內(nèi)Aβ1-42、p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、CaM、p-CaMKIIα、p-CaMKIIβ、p-CREB、ATF-1和cleaved caspase3蛋白的表達。<

4、br>　　結(jié)果：
　　1、Morris水迷宮檢測3組雙轉(zhuǎn)基因AD小鼠的空間學習記憶能力
　　(1)、定位航行實驗結(jié)果：與正常組小鼠相比，模型組小鼠的逃避潛伏期顯著延長(P＜0.01)；與模型組小鼠相比，H102給藥組的逃避潛伏期明顯縮短(P＜0.05)；H102給藥組與正常組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　(2)、空間探索實驗結(jié)果：與正常組小鼠相比，模型組小鼠在第三象限停留的時間顯著減少(P＜0.01)，跨越隱

5、匿平臺的次數(shù)顯著減少(P<0.01)，入水朝向角顯著增大(P<0.01)；與模型組小鼠相比，H102給藥組在第三象限停留的時間明顯增加(P＜0.05)，跨越隱匿平臺的次數(shù)明顯增加(P<0.05)，入水朝向角明顯減小(P<0.05)；H102給藥組與正常組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　2、H102對雙轉(zhuǎn)基因AD小鼠腦內(nèi)Aβ1-42、 p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、CaM、p-CaMKIIα、

6、p-CaMKIIβ、p-CREB、ATF-1和cleaved caspase3蛋白表達的影響
　　(1)、免疫組織化學染色結(jié)果：①.與正常組小鼠相比，模型組小鼠海馬和皮層中Aβ1-42和cleaved caspase3蛋白表達染色IOD值均明顯增加(均P<0.01)；與模型組小鼠相比，H102給藥組小鼠海馬和皮層中Aβ1-42和cleaved caspase3蛋白表達染色IOD值均明顯減少(均P<0.01)；H102給藥組小鼠海馬

7、和皮層中Aβ1-42和cleaved caspase3蛋白表達染色IOD值與正常組比較均無顯著性差異(均P＞0.05)。②.與正常組小鼠相比，模型組小鼠海馬和皮層中 p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1和p-CREB蛋白表達染色IOD值均顯著減少(均P<0.01)；與模型組小鼠相比，H102給藥組小鼠海馬和皮層p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1和p-CREB蛋白表達染色IOD值均明顯增加

8、(均P<0.01)；H102給藥組小鼠海馬和皮層中p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1和p-CREB蛋白表達染色IOD值與正常組比較均無顯著性差異(均P＞0.05)。
　　(2)、Western Blot實驗結(jié)果：①.與正常組小鼠相比，模型組小鼠腦中Aβ1-42、CaM和cleaved caspase3蛋白表達量均明顯增加(P<0.01)；與模型組小鼠相比， H102給藥組小鼠腦中Aβ1-42、CaM和cl

9、eaved caspase3蛋白表達量均明顯減少(P<0.01)；H102給藥組小鼠腦中Aβ1-42、CaM和cleaved caspase3蛋白表達量與正常組比較均無顯著性差異(P＞0.05)。②.與正常組小鼠相比，模型組小鼠海馬和皮層中p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、p-CaMKIIα、p-CaMKIIβ、p-CREB和ATF-1蛋白表達量均顯著減少(均P<0.01)；與模型組小鼠相比，H102給藥組小

10、鼠海馬和皮層p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、p-CaMKIIα、p-CaMKIIβ、p-CREB和ATF-1蛋白表達量均明顯增加(均P<0.01)；H102給藥組小鼠海馬和皮層中 p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、p-CaMKIIα、p-CaMKIIβ、p-CREB和 ATF-1蛋白表達量正常組比較均無顯著性差異(均 P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　β片層阻斷肽H1