高分子量透明質(zhì)酸治療LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷的活性研究及初步機(jī)制探索.pdf

1、目的:急性肺損傷是臨床上的危重癥，目前無特效藥。透明質(zhì)酸(HA)是內(nèi)源性物質(zhì)，可保濕、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等。但其對(duì)于急性肺損傷的作用研究較少。研究HA對(duì)急性肺損傷是否具有治療作用以及相關(guān)機(jī)制具有重要意義。
　　方法:(1)細(xì)胞實(shí)驗(yàn):用不同濃度LPS（1，10，50，100μg/mL）刺激A549細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)后(3，6，12，24h)，分別通過qPCR和ELISA法檢測(cè)炎癥因子IL-6，IL-8，TNF-α，IL-1β的mRNA和蛋

2、白表達(dá)量，探索LPS最佳作用濃度和作用時(shí)間，建立急性肺損傷模型;用0.3，0.5，0.7，1mg/mL的特定高分子量的HA治療LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷，qPCR和ELISA法分別檢測(cè)IL-6，IL-8，TNF-α，IL-1β的rmRNA和蛋白表達(dá)量，探索HA治療的量效關(guān)系。(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、LPS(5mg/kg)組、LPS+HA（3.5mg/mL）組，右肺固定后做石蠟切片，HE染色后病理學(xué)觀察，確認(rèn)建立急性肺損傷模型

3、及初步探索HA治療效果;SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、LPS組、LPS+HA(1mg/mL)、LPS+HA(2mg/mL)、LPS+HA(3.5mg/mL)組，左肺收集支氣管肺泡灌洗液，離心后沉淀物用于中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞計(jì)數(shù);統(tǒng)計(jì)存活率，探索HA對(duì)LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷大鼠死亡率的影響。(3)從分子水平初步探究HA對(duì)LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷的干預(yù)機(jī)制，RT-PCR,qPCR檢測(cè)TLR4mRNA表達(dá)變化，Western Blot檢測(cè)胞漿蛋白Iκ

4、B-α變化，NF-κB p65蛋白胞漿和胞核轉(zhuǎn)移變化。
　　結(jié)果:(1)1μβ/mL的LPS誘導(dǎo)A549細(xì)胞急性肺損傷模型成功建立;qPCR和ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，HA治療急性肺損傷效果在0.3～0.7mg/mL有效濃度范圍內(nèi)隨著濃度升高而愈加顯著。(2)與LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷模型組相比，HA治療組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰完整，炎性細(xì)胞中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞浸潤(rùn)減少，數(shù)量下降，且呈現(xiàn)HA劑量依賴性，說明HA治療減輕了LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的炎