藥物的雜質(zhì)檢查藥物分析

1、第一節(jié) 藥物的純度與雜質(zhì) 1.藥物的純度：是指藥物的純凈程度。 藥物中的雜質(zhì)是影響藥物純度的主要因素。 2.雜質(zhì)：無(wú)治療作用、對(duì)人體有害，或影響藥物的療效和穩(wěn)定性。3.雜質(zhì)的檢查收載在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的［檢查］項(xiàng)下 。,4.藥物的純度與化學(xué)試劑的純度,藥物的純度考慮雜質(zhì)的生理作用，藥物必須進(jìn)行臨床試驗(yàn)。藥品只有兩個(gè)等級(jí)：合格或不合格。化學(xué)試劑有很多等級(jí)，如基準(zhǔn)試劑、色譜純、優(yōu)級(jí)純（GR）、分

2、析純（AR）、化學(xué)純（CP）。,5.雜質(zhì)的來(lái)源,一是由生產(chǎn)過(guò)程中引入： 藥物在生產(chǎn)合成過(guò)程中 生產(chǎn)中所用溶劑與試劑的殘留以及與生產(chǎn)器皿接觸等而帶入雜質(zhì) 藥物在制成制劑的過(guò)程中二是在貯存過(guò)程中產(chǎn)生：外界條件變化：溫度、濕度、空氣、光線等可使藥物發(fā)生水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)變、聚合、潮解和發(fā)霉等而產(chǎn)生有關(guān)的雜質(zhì)。,6. 雜質(zhì)的分類,1、按雜質(zhì)的來(lái)源分類 一般雜質(zhì)特殊雜質(zhì)2、按雜質(zhì)的性質(zhì)分類 信號(hào)雜質(zhì)有毒有害雜

3、質(zhì),第2節(jié) 雜質(zhì)的限量檢查與計(jì)算,一、雜質(zhì)的限量定義 ：藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量表示：通常用百分之幾（%）或百萬(wàn)分之幾（ppm）來(lái)表示。,雜質(zhì)量≤ 雜質(zhì)限量＜雜質(zhì)量,,,藥品合格,藥品不合格,二、雜質(zhì)的限量檢查法與計(jì)算,雜質(zhì)的限量檢查 ：不要求測(cè)定其含量，而只檢查雜質(zhì)的量是否超過(guò)限量 1.對(duì)照法：不需測(cè)定雜質(zhì)的準(zhǔn)確含量2.靈敏度法3.比較法,供試品,,供試溶液,標(biāo)準(zhǔn)溶液,,對(duì)照溶液,,對(duì)照法,原理:,雜質(zhì)限量的計(jì)算,,,注

4、意事項(xiàng),須遵循平行操作原則，注意所用儀器、器皿的對(duì)稱性，供試溶液和對(duì)照溶液應(yīng)在完全相同的條件下反應(yīng)，如加入的試劑、反應(yīng)的溫度、放置的時(shí)間等均應(yīng)相同。只有這樣，反應(yīng)的結(jié)果才有可比性。,靈敏度法,是在指供試品溶液中加入試劑，在一定反應(yīng)條件下，觀察有無(wú)正反應(yīng)出現(xiàn)，以不出現(xiàn)正反應(yīng)為符合規(guī)定，即以該檢測(cè)條件下反應(yīng)的靈敏度來(lái)控制雜質(zhì)限量。特點(diǎn)：以該檢測(cè)條件下的靈敏度來(lái)控制雜質(zhì)限量，不需對(duì)照物質(zhì)。,,,,比較法,是指取一定量的供試品依法檢查，測(cè)得待

5、檢雜質(zhì)的吸收度、旋光度、pH值等與規(guī)定的限量比較，不得更大。特點(diǎn)：準(zhǔn)確測(cè)得雜質(zhì)的響應(yīng)值（吸收度、旋光度、pH值等）并與規(guī)定限量比較，不需對(duì)照物質(zhì) 。,第三節(jié) 一般雜質(zhì)檢查法,一般雜質(zhì)：在自然界中分布廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中容易引入的雜質(zhì)，包括氯化物、硫酸鹽、硫化物、氰化物、鐵鹽、重金屬、砷鹽、銨鹽、干燥失重、水分、熾灼殘?jiān)?、易炭化物、酸、堿、溶液顏色、溶液澄清度以及殘留溶劑等。,操作 注意：,應(yīng)遵行平行操作原則，包括儀器的

6、配對(duì)性、對(duì)照管與供試管同步操作；正確的比色、比濁方法；檢查結(jié)果不符合規(guī)定或在限度邊緣時(shí)應(yīng)對(duì)供試管和對(duì)照管各復(fù)查二份。,一、氯化物檢查法,（一）原理,（二）操作方法,1.供試溶液制備 取各品種項(xiàng)下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml(溶液如顯堿性，可滴加硝酸顯中性)，再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，應(yīng)濾過(guò)；置50ml納氏比色管中，加水使成40m1，搖勻，即得供試溶液。,2.對(duì)照溶液制備,取該品種項(xiàng)下規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液，置另一50

7、ml納氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40m1，搖勻，即得對(duì)照溶液。標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液的制備：（每1ml相當(dāng)于10ug的CI）,3.比濁與結(jié)果判斷,于供試溶液與對(duì)照溶液中，分別加入硝酸銀試液1.0m1，用水稀釋使成50ml，搖勻，在暗處放置5分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較所產(chǎn)生的渾濁。供試管所產(chǎn)生的渾濁不得比對(duì)照管深。,（三）注意事項(xiàng),1. 50ml溶液中含50～80?g的Cl?所顯渾濁梯度明顯，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)Na

8、Cl溶液5～8ml。2.在硝酸的酸性條件下檢查3.比濁前在暗處放置5分鐘，是為了避免光線直接照射使單質(zhì)銀析出 。4.將比色管置黑色背景上，從上向下觀察濁度,5.比色管：應(yīng)配對(duì)、管內(nèi)徑、刻度一致，不得用毛刷刷洗。6.供試液與對(duì)照液同時(shí)操作，加入試劑順序一致。7.如供試品帶顏色：采用內(nèi)消色法處理,二、硫酸鹽檢查法,1.原理,（二）測(cè)定條件,1. 標(biāo)準(zhǔn)K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中0.1～0.5mg所顯渾濁梯度明顯，

9、相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)K2SO4溶液1～5ml。2.反應(yīng)需在鹽酸酸性條件下進(jìn)行，且以50ml供試溶液中含稀鹽酸2ml為宜。,3. 試劑：氯化鋇 4.25%氯化鋇溶液相對(duì)穩(wěn)定，不必臨用前新鮮配制，存放時(shí)間過(guò)久，如有沉淀析出，即不能使用，應(yīng)予重配，加入25%氯化鋇溶液后，應(yīng)充分搖勻，以免影響濁度； 5. 比濁方法：同置于黑色背景上，自上向下觀察。,三、鐵鹽檢查法,1.原理,（一）硫氰酸鹽法,2. 測(cè)定條件,（1）標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液10?g Fe3+/ml

10、，用 FeNH4(SO4)2·12H2O（硫酸鐵銨）配制 50ml溶液中含10～50?g的Fe3+顯色梯度明顯，一般取標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液1.0～5.0ml,（2）反應(yīng)需在鹽酸酸性條件下進(jìn)行，且以50ml供試溶液中含稀鹽酸4ml為宜。,（3）試劑：硫氰酸銨。加過(guò)量硫氰酸銨，使反應(yīng)向正反應(yīng)方向進(jìn)行,（4）檢查Fe2+和Fe3+,（4）鐵鹽檢查時(shí)，加過(guò)硫酸銨可氧化Fe2+為Fe3+，同時(shí)可防止光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色。 （5

11、）比色方法：同置于白色背景上，自上向下觀察。,3. 干擾及排除,為了提高靈敏度或供試管與對(duì)照管色調(diào)不一致時(shí)，可用正丁醇提取后，分取正丁醇層比色。,四、重金屬檢查法 以鉛為代表,中國(guó)藥典（2005年版）共收載四法。第一法：硫代乙酰胺法第二法：熾灼殘?jiān)ǖ谌ǎ毫蚧c法第四法：微孔濾膜法,第一法 硫代乙酰胺法,1. 原理,適用于供試品不經(jīng)有機(jī)破壞，能溶于水、稀酸和乙醇的藥物,2. 測(cè)定條件,（1）標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液：

12、硝酸鉛 、10?gPb2+/ml，適宜比色范圍為27ml溶液中含10～20?g的Pb2+。（2）本法用2ml pH3.5的醋酸鹽緩沖液控制溶液pH值為3～3.5。（3）顯色劑：硫代乙酰胺,（1）供試品如有色，需經(jīng)處理后方可檢查。,A. 外消色法：在對(duì)照管中加稀焦糖溶液或其他無(wú)干擾的有色溶液。,B. 內(nèi)消色法,C. 改用第四法，微孔濾膜過(guò)濾法,3. 干擾及排除,（2）若供試品中有微量Fe3+存在，會(huì)氧化硫化氫生成單質(zhì)硫，干擾比色，加

13、入抗壞血酸或鹽酸羥胺（0.5～1.0g）還原Fe3+為Fe2+，可消除干擾,第二法 熾灼殘?jiān)?適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及不溶于水、稀酸、乙醇及堿的有機(jī)藥物。,500～600℃熾灼后的殘?jiān)?，?jīng)處理后，依第一法檢查。,1. 原理,2. 操作方法,第三法 硫化鈉法,適用于溶于堿而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物。如磺胺類、巴比妥類。,1. 原理,2. 測(cè)定條件,（1）NaOH堿性條件下,（2）顯色劑：硫化鈉,第四法 微孔濾膜法,適用于含

14、2～5?g重金屬雜質(zhì)及有色供試液的檢查。 依一法檢查，結(jié)果微孔濾膜過(guò)濾后比較色斑。,一般雜質(zhì)檢查法的區(qū)別,五、砷鹽檢查法,（一）古蔡氏法 （二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）,砷化氫遇HgBr2試紙生成黃色～棕色的砷斑，與2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液在相同條件下生成的砷斑比較,1. 原理,（一）古蔡氏法,2. 操作方法,（1）標(biāo)準(zhǔn)砷斑用2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液制備,（2）供試品需經(jīng)有機(jī)破壞，則標(biāo)準(zhǔn)砷溶液應(yīng)平行操作,3. 測(cè)定條件,（1）

15、標(biāo)準(zhǔn)砷溶液臨用新配，1?gAs/ml。,（2）酸為反應(yīng)物，酸量應(yīng)足夠，所以加濃鹽酸5ml。,,B. 碘化鉀被氧化生成的I2又可被氯化亞錫還原為I-，I-與反應(yīng)中生成的Zn2+能形成穩(wěn)定的配位離子，有利于生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行；,C. 氯化亞錫與鋅作用，在鋅表面形成鋅錫齊，使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生；,,,（3）酸性氯化亞錫及碘化鉀的作用是：還原As5+為As3+，加快反應(yīng)速度；,D. 可抑制微量Sb的干擾，在實(shí)驗(yàn)條件下，100 ?gSb

16、存在不干擾。,（4）醋酸鉛棉花的作用是消除鋅粒及供試品中少量硫化物的干擾，醋酸鉛棉花60mg裝管高度60～80mm。,（5）鋅粒應(yīng)無(wú)砷,（6）砷斑不穩(wěn)定，應(yīng)立即觀察,（二）Ag-DDC法 原理,,直接比色或于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，進(jìn)行比較。,六、溶液顏色檢查法,控制藥物中有色雜質(zhì)限量,第一法 目視比色法 即與標(biāo)準(zhǔn)比色液比較的方法，全波長(zhǎng)范圍定性觀察,觀察方法,標(biāo)準(zhǔn)比色液的配制,第二法 分光光度法 單

17、一波長(zhǎng)定量,第三法 色差計(jì)法 全波長(zhǎng)范圍定量,本法是通過(guò)色差計(jì)直接測(cè)定溶液的透視三刺激值，對(duì)其顏色進(jìn)行定量表述和分析的方法。,測(cè)色儀器一般為光電積分型色差計(jì),七、澄清度檢查法,檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)，用作注射劑的原料藥一般應(yīng)作此項(xiàng)檢查。,1. 檢查方法 對(duì)照法,2. 反應(yīng)原理：烏洛托品在偏酸性條件下水解產(chǎn)生甲醛，甲醛與肼縮合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色渾濁。,1.00％硫酸肼溶液與10％烏洛托品溶液等量混合配制濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備

18、液 濁度標(biāo)準(zhǔn)原液 濁度標(biāo)準(zhǔn)液（5個(gè)級(jí)號(hào)）,3. 判斷 藥典中規(guī)定的“澄清”，系指供試品溶液的澄清度相同于所用溶劑，或未超過(guò)0.5號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液。,4. 溶劑：水、酸、堿、有機(jī)溶劑 有機(jī)酸的堿金屬鹽類藥物強(qiáng)調(diào)用“新沸過(guò)的冷水”,定義：熾灼殘?jiān)侵笇⑺幤罚ǘ酁橛袡C(jī)化合物）經(jīng)加熱灼燒炭化后，再加硫酸并熾灼(700～800℃)至恒重后遺留的金屬氧化物或其硫酸鹽。,八、熾灼殘?jiān)鼨z

19、查法,1. 原理 樣品炭化后+ H2SO4濕潤(rùn)→700～800℃熾灼至恒重→熾灼殘?jiān)蛩峄曳郑?2. 操作方法,3. 注意事項(xiàng),（1）供試品的取樣量應(yīng)根據(jù)熾灼殘?jiān)蘖亢头Q量誤差決定。 （2）含氟的藥物對(duì)瓷坩堝有腐蝕，應(yīng)采用鉑坩堝。,,（3）若殘?jiān)枇糇髦亟饘贆z查，則500～600℃熾灼至恒重。（4）加硫酸處理是使雜質(zhì)轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的硫酸鹽，并幫助有機(jī)物炭化,,九、易炭化物檢查法,檢查藥物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的

20、微量有機(jī)雜質(zhì)。,,方法：H2SO4炭化后與對(duì)照液比較。對(duì)照液：（1）“溶液顏色檢查”項(xiàng)下的標(biāo)準(zhǔn)比色液；（2）由比色用氯化鈷液，比色用重鉻酸鉀液，比色用硫酸銅液按規(guī)定方法配成的對(duì)照液；比色：同置白色背景前，平視觀察比較。,十、干燥失重測(cè)定法,定義： 干燥失重是指藥物在規(guī)定條件下經(jīng)干燥后所減失的重量，主要是水分，也包括其它揮發(fā)性物質(zhì)。,測(cè)定方法（一）常壓恒溫干燥法,適用于受熱較穩(wěn)定的藥物。干燥溫度一般為105℃。,★第二次及以后

21、各次稱重均應(yīng)在規(guī)定條件下繼續(xù)干燥1h后進(jìn)行。,（二）恒溫減壓干燥法,適用于熔點(diǎn)低，受熱不穩(wěn)定或水分不易除的藥物。,除另有規(guī)定外，壓力應(yīng)在2.67kPa（20mmHg）以下。,（三）干燥器干燥法,適用于受熱易分解或揮發(fā)的供試品。,常用干燥劑：無(wú)水氯化鈣、硅膠、P2O5,,十一、水分測(cè)定法,費(fèi)休氏法甲苯法（適用于揮發(fā)性藥物的測(cè)定）主要采用費(fèi)休氏法測(cè)定藥品中的水分。,費(fèi)休氏法原理：,利用碘在吡啶和甲醇溶液中將二氧化硫氧化成三氧化硫時(shí)，需要

22、定量的水參加反應(yīng)的原理來(lái)測(cè)定樣品中的水分含量，為非水溶液中的氧化還原滴定反應(yīng)，采用的標(biāo)準(zhǔn)滴定液稱費(fèi)休氏試液，是由碘、二氧化硫、吡啶和甲醇按一定比例組成。,1.指示滴定終點(diǎn)方法：①自身作指示劑法，即利用碘的顏色指示終點(diǎn)，終點(diǎn)前溶液呈淺黃色，終點(diǎn)時(shí)溶液為紅棕色（微過(guò)量的費(fèi)休氏試劑中碘的顏色）②永停滴定法：按永停滴定法操作，當(dāng)?shù)味ㄖ岭娏饔?jì)指針突然偏轉(zhuǎn)，并持續(xù)數(shù)分鐘不退回時(shí)，即為商定終點(diǎn)。,2、操作方法,費(fèi)休氏試液的標(biāo)定 采用水分側(cè)定儀

23、直接標(biāo)定。或取干燥的具塞玻瓶，精密稱入重蒸餾水約30mg，除另有規(guī)定外加無(wú)水甲醇2~5ml，在避免空氣中水分侵入的條件下，用費(fèi)休氏試液滴定至溶液由淺黃色變?yōu)榧t棕色，或用永停滴定法指示終點(diǎn)；另作空白試驗(yàn)。,供試品的測(cè)定：精密稱取供試品適量(約消耗費(fèi)休氏試液1～5ml)，除另有規(guī)定外，溶劑為無(wú)水甲醇，用水分測(cè)定儀直接測(cè)定，或?qū)⒐┰嚻分酶稍锏木呷Ｆ恐校尤軇?~5ml，在不斷振搖(或攪拌)下用費(fèi)休氏試液滴定至溶液由淺黃色變?yōu)榧t棕色，或用永

24、停滴定法指示終點(diǎn)；另作空白試驗(yàn)。,,所用儀器應(yīng)干燥，并能避免空氣中水分的侵入；測(cè)定操作宜在干燥處進(jìn)行。試劑的含水量應(yīng)控制在0.1%以下,十二、殘留溶劑測(cè)定法,殘留溶劑：指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及在制劑制備過(guò)程中使用的，但在工藝過(guò)程中未能完全去除的有機(jī)溶劑。,第一類溶劑：毒性較大，可致癌并對(duì)環(huán)境有害，應(yīng)盡量避免使用(如苯、四氯化碳等) 第二類溶劑：對(duì)人有一定毒性，應(yīng)限量使用(如乙腈、三氯甲烷等) 第三類溶劑：對(duì)人的健康危害較小，

25、可推薦使用(如醋酸),檢查方法 中國(guó)藥典采用氣相色譜法檢查殘留有機(jī)溶劑,第一法 毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣等溫法 當(dāng)需要檢查有機(jī)溶劑的數(shù)量不多，且極性差異較小時(shí)，可采用此法。第二法 毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣系統(tǒng)程序升溫法 當(dāng)需要檢查有機(jī)溶劑的數(shù)量較多，且極性差異較大時(shí)，可采用此法。第三法 溶液直接進(jìn)樣法 主要適用于企業(yè)對(duì)生產(chǎn)工藝中特定的殘留溶劑的控制，可采用填充柱，亦可采用適宜極性的毛細(xì)管柱。,第四節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查

26、法,特殊雜質(zhì)： 是指在該藥物的生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中可能引入的中間體、副產(chǎn)物以及分解產(chǎn)物等特有雜質(zhì)。,一、利用藥物和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上存在的差異進(jìn)行雜質(zhì)檢查,1.臭味2.揮發(fā)性3.顏色4.溶解行為5.旋光性和吸光性等,二、利用藥物和雜質(zhì)在化學(xué)性質(zhì)上的差異進(jìn)行雜質(zhì)檢查,1.呈色反應(yīng)2.沉淀反應(yīng)3.生成氣體4.氧化還原性的差異5.酸堿性的差異,三、利用藥物和雜質(zhì)在色譜行為上的差異進(jìn)行雜質(zhì)檢查,1.薄層色譜法2.高效液相色譜