藥物分析維生素類(lèi)藥物的分析

1、第九章　維生素類(lèi)藥物的分析The Analysis of Vitamines,概 述,維生素是維持人體正常生理機(jī)能所必需的生物活性物質(zhì)。 如果人體缺少某種維生素，就會(huì)引起維生素缺乏癥，而影響人體的正常生理機(jī)能。 例如: VA 缺乏—夜盲癥 VB1缺乏—腳氣病,脂溶性： VA、VD、VE、VK等水溶性：B族（VB1、VB2等）、VC 、煙酸、 葉酸、泛酸等,按溶

2、解性分類(lèi),§9.1 維生素A的分析,一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)VA含有共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已稀(有多種異構(gòu)體),R=H VA醇 VA1R= —COCH3 VA醋酸酯R= —COC15H31 VA棕櫚酸酯,VA為油狀物,存在于魚(yú)肝臟中,稱(chēng)魚(yú)肝油,不溶于水. 有人工合成的.,國(guó)際單位IU=0.344微克維生素Ａ醋酸酯；　　　　IU＝0.300微克維生素Ａ醇換算：1g

3、維生素Ａ醋酸酯相當(dāng)于：,1g維生素Ａ醇相當(dāng)于：,VA1:VA2:(去氫VA)VA3:(去水VA),二、鑒別試驗(yàn)1、三氯化銻反應(yīng) VA在飽和無(wú)水三氯化銻的無(wú)醇三氯甲烷溶液中顯藍(lán)色，漸變成紫紅色。（P245）,,注意:在水中三氯化銻水解,必須在絕對(duì)無(wú)水中進(jìn)行!,2、紫外吸收光譜 VA的無(wú)水乙醇溶液在326nm有最大吸收。,VA(5個(gè)共軛雙鍵)在鹽酸中加熱,生成6個(gè)共軛雙鍵的去水VA VA在

4、326nm有一個(gè)吸收峰 去水VA在350-390nm有三個(gè)吸收峰（P247）,3、TLC：,確認(rèn)醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，例：VA和其標(biāo)準(zhǔn)品用環(huán)己烷溶解 展開(kāi)劑：環(huán)己烷—乙醚（80：20） 板：硅膠G 顯色：磷鉬酸為顯色劑 Rf： VA 醇 0.１ VA 醋酸酯 0.4５ VA棕櫚酸酯 0.7,三．含

5、量測(cè)定,維生素Ａ中含有稀釋用油和其它雜質(zhì)，所測(cè)得的吸光度不是維生素Ａ獨(dú)有的吸收．對(duì)測(cè)定有影響。即在三個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度，進(jìn)行校正后再計(jì)算。稱(chēng)為三點(diǎn)校正法原理：吸光度是維生素A和雜質(zhì)吸收之和，測(cè)得A值需校正。（最大吸收為328nm),１．紫外分光光度法－三點(diǎn)校正法,方法:(1)分別測(cè)300、316、328、340、360nm吸光度，求出各波長(zhǎng)吸光度與328nm吸光度比值，各比值與P249表中數(shù)據(jù)對(duì)比；(2)若比值不超過(guò)

6、7;0.02可直接用測(cè)得A值；(3)若比值超出±0.02則A需校正： A（校正）=3.52(2A328-A316-A340)(4)計(jì)算：,A:吸光度;C:濃度(g/mL);L:溶液厚度(cm);,求效價(jià)：每g供試呂中所含維生素A的國(guó)際單位,求百分含量：,A：吸光度（校正后的吸光度）D：稀釋倍數(shù)；1900：以環(huán)已烷為溶劑時(shí)的換算因子；L：比色池厚度；W：取樣量；,§9.2　維生素B1的分析,一

7、、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)維生素B1:氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過(guò)亞甲基連接成的季銨類(lèi)化合物. 白色結(jié)晶,溶于水,顯酸性.,學(xué)名: 氯化4-甲基-3-[（2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基）甲基]-5-（2-羥乙基）噻唑的鹽酸鹽 俗名:鹽酸硫胺,二. 鑒別試驗(yàn),1. 硫色素?zé)晒夥磻?yīng)： 維生素B1在堿性溶液中，與鐵氰化鉀氧化成硫色素，在正丁醇中顯藍(lán)色熒光,VB1專(zhuān)屬反應(yīng)，用于鑒別和含量測(cè)定。,,2、沉淀反應(yīng)：

8、 碘化汞鉀-------淡黃色沉淀 碘--------紅色沉淀VB1 硅鎢酸--------白色沉淀 苦味酸--------扇形白色結(jié)晶,,,,,三. 含量測(cè)定1、非水溶液滴定法：（Ch.P收錄） VB1分子中含有已成鹽的伯胺和季銨基團(tuán)，在非水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。,溶劑：冰醋酸 / 醋酸汞 指示劑：喹哪定紅- 亞甲藍(lán)混合指示液

9、 滴定劑：高氯酸（0.1mol/L) 終點(diǎn)：天藍(lán)色 摩爾比：VB1：高氯酸=1：2 VB1摩爾質(zhì)量=337.27 滴定度T=0.1×(1/2) ×337.27=16.86mg/ml,2、紫外UV（中國(guó)藥典）VB1片：方法與片劑含量測(cè)定相同(246nm),VB1注射液：與液劑相同。（246nm),§9.3 維生素C的分析一、化學(xué)結(jié)構(gòu),1、 具有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)。

10、堿性下可水解。2、 具有烯二醇基。 還原性，能夠被氧化成去氫抗壞血酸。3、結(jié)構(gòu)與糖類(lèi)相似，具有糖性質(zhì)。 溶于水，酸性，旋光性。,D(-)-異抗壞血酸,L(+)-異抗壞血酸,L(+)-抗壞血酸,D(-)-抗壞血酸,4、具有4種光學(xué)異構(gòu)體。其中生理活性最強(qiáng)的是L（+）-抗壞血酸,二、鑒別試驗(yàn) 1、硝酸銀反應(yīng)（中國(guó)藥典） 烯二醇基具有還原性，可被硝酸銀氧化成去氫抗血酸，同時(shí)生成黑色的銀

11、。,2、與2，6-二氯靛酚（染料）反應(yīng) VC被還原為無(wú)色的酚亞胺,3. 糖的性質(zhì) VC的結(jié)構(gòu)很象糖結(jié)構(gòu)，具有糖的性質(zhì)VC + 三氯化醋酸或鹽酸----水解----脫羧------戊糖----失水----糠醛-----（加吡咯，加熱）----藍(lán)色,4、紫外分光光度法（英國(guó)藥典）VC在鹽酸溶液中，243nm最大吸收。,三．含量測(cè)定,1.   碘量法（Ch.P收錄）VC在醋酸條件下，被碘定量

12、氧化。,加入淀粉指示劑，藍(lán)色不褪為碘過(guò)量（30S內(nèi)）。由消耗碘量計(jì)算含量。,操作：（P265）,終點(diǎn)顏色：無(wú)色→藍(lán)色 1ml 0.1mol/L碘液，1ml?8.806mg C6H8O6加入新沸放冷的水為了減少水中溶解氧的影響。酸性：使VC在空氣中氧化速度減慢。VC注射液中常加有亞硫酸鹽如NaHSO3作為抗氧劑.,終點(diǎn)的顏色是溶液由無(wú)色變?yōu)榧t色。,氧化型（紅色）,還原型（無(wú)色）,+,+,2、 2,6-二氯靛酚滴定法

13、 酸性下直接用2,6-二氯靛酚滴定，用滴定劑自身的顏色變化指示終點(diǎn)，不需要另外的指示劑。,3、高效液相色譜法 HPLC P276,§9.4 維生素D VD是一類(lèi)抗佝僂病維生素的總稱(chēng),有片劑,注射劑,膠囊等.一、結(jié)構(gòu)（P268） 開(kāi)環(huán)麥角甾烯醇，又稱(chēng)麥角骨化酸。,VD2，VD3 無(wú)色針狀結(jié)晶，旋光性，不溶于水。,二、鑒別試驗(yàn)1、顯色反應(yīng),2、維生素D2和D3的區(qū)分,三、含量測(cè)定 高效液

14、相色譜法，藥典收錄。,名稱(chēng)：消旋α-生育酚醋酸酯（ α-異構(gòu)體生理活性最強(qiáng)）母核：苯駢二氫吡喃衍生物，苯環(huán)上有一乙?；姆恿u基側(cè)鏈：脂肪烷烴性質(zhì)：不溶于水，油狀，微黃色液體。,§9.5 維生素E（稱(chēng)為生育酚）一、結(jié)構(gòu)：苯并二氫吡喃醇衍生物，,二、鑒別試驗(yàn)1、硝酸反應(yīng)：（藥典收錄）VE在硝酸條件下,水解生成生育酚.生育酚被硝酸氧化為鄰醌結(jié)構(gòu)的生育紅. VE + HNO3 ----水解生成生育酚-----生育紅（橙紅色

15、）2、水解后氧化反應(yīng)： VE在堿性條件下水解，得α—生育酚，在聯(lián)吡啶和三氯化鐵試液的作用下，反應(yīng)產(chǎn)生血紅色配離子。VE+KOH – α生育酚（加入三氯化鐵）--生育醌 + 鐵配合物 （血紅色）,3、UV吸收：VE的0.01%無(wú)水乙醇液： λmax=284nm

16、λmin=254nm4、紅外光譜（中國(guó)藥典）,三、雜質(zhì)檢查檢查游離生育酚: ChP2005鈰量法：用Ce(SO4)2(0.01mol/L)滴定， 指示劑：二苯胺終點(diǎn)：亮黃→灰紫 消耗Ce(SO4)2液不得超過(guò)1.0ml。,1、鈰量法（中國(guó)藥典）原理：VE用硫酸加熱回流，水解成生育酚，用硫酸鈰定量地氧化為對(duì)一生育醌，過(guò)量的硫酸鈰氧化二苯胺指示劑而指示滴定終點(diǎn)。 終點(diǎn)：亮黃→灰紫 ，需作空白試驗(yàn)。,四、含量測(cè)定,2、氣相色

17、譜法：Chp2005,3、高效液相色譜法 日本藥局方（JP13）,練習(xí)題：維生素AD膠丸中維生素A的含量測(cè)定已知：平均膠丸重為0.0815g維生素A的標(biāo)示量為10000IU/丸取樣：,測(cè)定數(shù)據(jù)如下表，求：維生素A的標(biāo)示百分含量。,首先要求樣品的 。,計(jì)算吸收度比值和吸收度比值差。（填于上表）,由此可知，應(yīng)該用測(cè)得的328nm處的吸收度計(jì)算。,然后計(jì)算校正吸收度與未校正吸收度相差的百分?jǐn)?shù),

18、由結(jié)果知，需計(jì)算校正吸收度。,維生素A的標(biāo)示含量,維生素A醋酸酯膠丸含量測(cè)定:取內(nèi)容物39.1 mg,加環(huán)己烷溶解并稀釋成100ml，在下列五個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)得吸收度A值如下：,已知：平均膠丸內(nèi)容物重為0.08736g;維生素A的標(biāo)示量為3000 IU/丸 試求：維生素A的標(biāo)示百分含量？,維生素A醋酸酯膠丸的含量測(cè)定，取內(nèi)容物W，加環(huán)己烷溶解并稀釋至10ml，搖勻，精密量取0.1ml,再加環(huán)己烷稀釋至10ml ，使其濃度為9