抗生素類藥物分析

1、第十六章抗生素類藥物的分析,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,【大綱要求】,1、掌握β-內(nèi)酰胺類的鑒別和高效液相色譜法等含量測定方法。2、掌握氨基糖苷類抗生素的鑒別試驗，慶大霉素C組分的檢查方法。3、掌握四環(huán)素類抗生素的鑒別試驗和特殊雜質(zhì)的檢查方法。4、熟悉本類藥物的化學結(jié)構(gòu)與分析方法的關(guān)系。5、了解抗生素類藥物中高分子雜質(zhì)的控制方法。,藥學院藥物分析教研室,www.th

2、emegallery.com,Company Logo,抗生素的概念及特點,◆,低化學純度－同系物多、異構(gòu)體多、降解物多,◆,活性組分的變異性－生產(chǎn)過程中條件的變化,◆,不穩(wěn)定性－不穩(wěn)定性結(jié)構(gòu),是指“在低濃度情況下對某些生物的生命活動有特異性抑制作用一類化學物質(zhì)的總稱”,藥學院藥物分析教研室,第一節(jié) 概 述,www.themegallery.com,Company Logo,Quality Analysis/Quality Co

3、ntrol-QA/QC,Identification,㈠,1、顯色反應－特殊基團的反應2、光譜法－特征吸收3、色譜法－保留行為4、生物學方法－抗菌能力,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,㈡,Investigation,1、常規(guī)檢查－水份、酸堿度等2、有機和無機雜質(zhì)檢查3、異常物質(zhì)的檢查－異常毒性、熱原等4、其他檢查－其他共存組分,藥學院藥物分析教研室,www.theme

4、gallery.com,Company Logo,（三）(Potency) Determination,1、微生物檢定法稀釋法比濁法管碟瓊脂擴散法－抑菌圈靈敏度高、需用量少適用范圍廣－純品、不純品、已知的和新的可一次測定同類型抗生素的總效價－無需分離純化與臨床的應用要求一致操作繁瑣、費時費力誤差較大,,,,Potency:是指每ml或每mg中含有某種抗生素有效成分的多少－u/μg,是以抗生素對微生物的殺傷或抑制程度為指

5、標來判斷效價的一種方法,,是結(jié)構(gòu)復雜和多組分抗生素效價測定的首先方法,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,2、物理化學法High-performance liquid chromatographyLiquid chromatography-Mass spectrometr)UV容量法準確可靠、專屬性高、操作簡單、省時、樣品用量少,,1、對結(jié)構(gòu)已知或提純的抗生素2、需要標準

6、品對照,,儀器分析方法,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,抗生素的分類,,β－內(nèi)酰胺類抗生素氨基糖苷類抗生素四環(huán)素類抗生素大環(huán)內(nèi)酯類抗生素多烯大環(huán)類抗生素－制菌霉素、兩性霉素多肽類抗生素－放線菌素、多黏菌素苯烴胺類抗生素－氯霉素,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,第二節(jié) β-內(nèi)酰胺類抗生素,6-APA,7-ACA

7、,氫化噻唑環(huán),氫化噻嗪環(huán),藥學院藥物分析教研室,（一）結(jié)構(gòu),www.themegallery.com,Company Logo,,發(fā)展史,1929年，弗來明(Alexander Fleming) 發(fā)現(xiàn)青霉素。1958年謝漢合成6-氨基青霉烷酸(6-APA)成功。開創(chuàng)了半合成青霉素的時代1961年，頭孢菌素C被發(fā)現(xiàn)，頭孢菌素迅速發(fā)展。80年代:廣譜碳青霉烯類上市。,www.themegallery.com,Company Logo,

8、青霉素,（青霉素鉀、鈉）,,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,氨芐西林（氨芐青霉素）,,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,阿莫西林（羥氨芐青霉素）,,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,普魯卡因青霉素,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Comp

9、any Logo,頭孢氨芐,,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,頭孢羥氨芐,,藥學院藥物分析教研室,,,藥品名,R-取代基,,青霉素鉀阿膜西林氨芐西林苯唑西林,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,㈡ 理化性質(zhì),1、酸性與溶解性2、旋光性3、紫外吸收特性4、不穩(wěn)定性,,藥學院藥物分析教研室,www.themegalle

10、ry.com,Company Logo,酸性,結(jié)構(gòu)特點與性質(zhì),,與堿金屬(Na+、K+)成鹽,（1）羧基,易溶于水,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,與有機堿(普魯卡因)成鹽,難溶于水,普魯卡因青霉素,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,,（2）手性C,頭孢菌素類 C6 C7,青霉素類 C3 C5

11、 C6,旋光性,﹡,﹡,﹡,﹡,﹡,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,,（3）共軛體系,青霉素類 母核無明顯UV 多數(shù)有苯環(huán)取代基,UV,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,青霉素的降解途徑,,與含水量和純度密

12、切相關(guān),藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,青霉素的降解產(chǎn)物,青霉噻唑酸－青霉素酶青霉酸－強酸性環(huán)境青霉烯酸－弱酸性環(huán)境青霉醛－強酸性-加熱青霉胺－強酸性-加熱/青霉素酶-重金屬,,降解產(chǎn)物,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,三、鑒別反應,（一） 顯色反應,羥肟酸鐵反應,藥學院藥物分析教研室,www.themegalle

13、ry.com,Company Logo,茚三酮反應,,α-氨基,藍紫色,,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,雙縮脲反應,似肽鍵,紫,,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,與重氮苯磺酸反應,橙黃色,重氮苯磺酸,-,-,5,6,OH,H,C,（偶合）,酚羥基,頭孢哌酮,,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com

14、,Company Logo,與變色酸-硫酸反應,活潑“-CH2-”,青霉素阿莫西林氨芐西林,△（分解）,變色酸,顯色,藥學院藥物分析教研室,,www.themegallery.com,Company Logo,K+、Na+的火焰反應,（二）各種鹽的反應,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,沉淀反應（青霉素鹽）,遇酸→↓,在過量HCl或有機溶劑中溶解,,藥學院藥物分析教研室,ww

15、w.themegallery.com,Company Logo,重氮化 - 偶合反應,,重氮化-偶合反應,,芳伯氨基,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,與三硝基苯酚反應,△,二芐基乙二胺,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,,藥學院藥物分析教研室,mp,www.themegallery.com,Company Logo,樣品、分

16、解產(chǎn)物,Cu2+,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,pH3.8,分子重排,藥學院藥物分析教研室,,www.themegallery.com,Company Logo,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,本類藥物的紫外光譜鑒別法通常利用最大吸收波長鑒定法：將供試品配成適當濃度的溶液，直接測定紫外吸收光譜，根據(jù)其最大吸收波長或最大吸

17、收波長處的吸光度進行鑒定。如頭孢唑啉鈉的紫外鑒別法：取本品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含16?g的溶液，在272nm的波長處有最大吸收。,www.themegallery.com,Company Logo,2. 紅外吸收光譜(IR) 紅外吸收光譜反映了分子的結(jié)構(gòu)特征，各國藥典對收載的β-內(nèi)酰胺類抗生素幾乎均采用了本法進行鑒別。該類抗生素的β-內(nèi)酰胺環(huán)羰基的伸縮振動(1750cm-1～1800cm-1)，仲酰胺的氨基、羰基的伸

18、縮振動(3300cm-1，1525 cm-1，1680 cm-1)、羧酸離子的伸縮振動(1600cm-1，1410cm-1)是該類抗生素共有的特征峰。,www.themegallery.com,Company Logo,,,3180cm-1?N-H,β–內(nèi)酰胺 ?C=O,1780cm-1,3470cm-1?O-H,1690cm-1仲酰胺?C=O,1250cm-1?C-O,以阿莫西林為例,藥學院藥物分析教研室,www.t

19、hemegallery.com,Company Logo,對照品對照法,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,三、檢查,本類抗生素的雜質(zhì)主要有高分子聚合物，有關(guān)物質(zhì)，異構(gòu)體等，一般采用HPLC法控制其限量，也有采用測定雜質(zhì)的吸光度來控制雜質(zhì)量的。此外，有的還進行結(jié)晶性、抽針與懸浮時間等有效性試驗，部分抗生素還檢查有機溶劑殘留量。 (一) 聚合物 (二) 有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體

20、 (三) 吸光度 (四) 有機溶劑 (五) 結(jié)晶性,www.themegallery.com,Company Logo,四、含量測定,各國藥典收載的青霉素類和頭孢菌素類的含量測定除少數(shù)幾個樣品采用抗生素微生物檢定法測定外，大多采用HPLC測定方法。 高效液相色譜法是近年來發(fā)展最快的方法，它能有效地分離供試品中可能存在的降解產(chǎn)物、未除盡的原料及中間體等雜質(zhì)，并能準確定量，適用于本類藥物的原料、各種制劑及生

21、物樣本的分析測定。ChP2010收載的本類抗生素中除磺芐西林鈉采用微生物檢定法測定含量外，其余均采用HPLC法測定含量。,www.themegallery.com,Company Logo,含量測定-容量法和儀器分析法,1、碘量法原理：利用青霉素或頭孢菌素不消耗碘，而其降解產(chǎn)物消耗碘的性質(zhì)，采用剩余碘量法測定，并以標準對照法計算含量。,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,反應分兩步

22、進行：1. 水解反應(按化學計算量進行)2. 氧化-還原反應(無固定的量關(guān)系，受溫度、pH值和時間等因素影響，應嚴格控制反應條件并采用標準品平行對照測定),藥學院藥物分析教研室,,第一步,第二步,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,V樣空,V樣,V對空,V對,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,空白試驗,A、消除樣品已降解產(chǎn)物

23、的干擾B、消除樣品中其他消耗碘的雜 質(zhì)的干擾C、消除碘揮發(fā)造成的誤差,以未經(jīng)水解的樣品作空白測定,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,,,,,,空白,樣品,,,,Na2S2O3,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,采用標準品平行對照測定,A、可消除溫度、pH、操作、環(huán) 境等條件的影響B(tài)、使本法測定結(jié)果與微生物檢定

24、 法一致,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,（1）弱酸性 pH4.5,堿↑ I2 → IO3- + I-,酸↑ 普魯卡因與碘在酸性條件 下會產(chǎn)生復鹽沉淀,（2）溫度 24～26℃,溫度＞38 ℃ 未水解的供試品亦消耗碘,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,（3）水解時間,以水

25、解20分鐘后的耗碘量最大,（4）反應時間,反應20分鐘后，耗碘量隨時間的變化較小，可減小含量測定的誤差。,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,（1）靈敏度高,樣品 : 碘 = 1 : 8,（2）反應條件、實驗操作要求高,加試劑次序、反應時間、滴定速度相同,4I2→8I-,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,原料,藥學院藥物分析

26、教研室,www.themegallery.com,Company Logo,可見-紫外分光光度法,2.,原理：利用青霉素的降解產(chǎn)物青霉烯酸在320 nm～360 nm處有強烈吸收特性，并且該降解產(chǎn)物與Cu2+或Hg2+形成穩(wěn)定并易于測定的配位化合物，從紫外分光光度法測定。硫醇汞鹽法酸水解－銅鹽法羥肟酸比色法,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,（1）原理,青霉烯酸硫醇汞鹽,青霉

27、素族,HgCl2,（咪唑）,,,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,藥學院藥物分析教研室,,www.themegallery.com,Company Logo,（2）方法,對照品法,計算,pH 9,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,（3）注意,側(cè)鏈有-NH2時，需加醋酐先 將其乙?；蟛拍馨l(fā)生上述 反應,藥學院藥物分

28、析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,,,藥學院藥物分析教研室,,www.themegallery.com,Company Logo,青霉素族,,pH=4,青霉烯酸,,Cu2+,穩(wěn)定的化合物,A320nm,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,紅色,NaOH,羥肟酸衍生物,,,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Com

29、pany Logo,4、高效液相色譜法原理：利用青霉素類抗生素在一定條件下在反相硅膠上的保留行為的不同而實現(xiàn)高效分離，并與標準品相對照，而對其進行定量的一種方法。優(yōu)化色譜分析條件（1）Column -CN ODS C18 C8 -Ben（2）mobile phase/flow rate（3）column temperature （4）detection wavelength（5）workstation samp

30、le preparation,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,實驗注意事項（1）色譜峰要達到較好的分離－基線分離(base separation)（2）需要標準品對照，用外標法定量（3）可同時測定多個組分的含量（4）需要排除制劑中輔料等雜質(zhì)對測定的干擾,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,生物樣本中β-內(nèi)酰胺類抗生素的

31、分析,血漿尿樣唾液膽汁,,生物樣本,色譜柱：Hypersil ODS C18 (200 mm×4.6 mm, I.D. 5μm)樣品制備：取血漿200μL，加入內(nèi)標5μL，再加入HCLO4，窩旋提取,Internal standard IS,,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素,鏈霉素 雙氫鏈霉素新霉素

32、 卡那霉素慶大霉素 巴龍霉素,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,鏈霉胍 + 鏈霉糖 + N-甲基-L-葡萄糖胺,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,鏈霉素：,鏈霉胍,鏈霉糖,N-甲基-L-葡萄糖胺,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,D-葡萄糖胺+脫氧鏈霉胺+

33、D-核糖+巴龍霉糖,,巴龍胺,,巴龍二糖胺,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,絳紅糖胺 + 脫氧鏈霉胺 + 加洛糖胺,藥學院藥物分析教研室,慶大霉素,,絳紅糖胺,紫素胺,2-脫氧鏈霉胺,加洛糖胺,N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,慶大霉素C復合物 慶大霉素C1

34、 R=H R1、R2=CH3 慶大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 慶大霉素C1a R、R1、R2=H 慶大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H 　慶大霉素C2b R=R1=H R2=CH3,,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,多與硫酸成鹽,堿性,

35、（一）,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,鏈霉素 pH5～7.5慶大霉素 pH2～12,藥學院藥物分析教研室,,,,,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,羥基胺結(jié)構(gòu),,△,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,（2）Molisch反應 具有五碳糖或六碳

36、糖的氨基糖苷類抗生素經(jīng)酸水解后，在鹽酸作用下脫水生成糠醛或羥甲基糠醛，加入α –萘酚（紅紫色）或蒽酮（藍紫色）（3）Elson-Morgan反應 水解產(chǎn)生的N-甲基-L-葡萄糖胺在堿性溶液中與乙酰丙酮合成吡咯衍生物，再與對二甲氨基苯甲醛的酸性醇溶液反應，生成櫻桃紅色縮合物。,藥學院藥物分析教研室,,紅紫色,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,（4）麥芽酚反應－鏈霉素的特征

37、反應 鏈霉素水解得到的鏈霉糖經(jīng)分子重排使環(huán)擴大形成六元環(huán)，然后消除N-甲基葡萄糖胺，再消除鏈霉胍，生成α-甲基-β-羥基-γ-吡喃酮（麥芽酚），該化合物與Fe3+在弱酸性溶液中形成紅紫色配位化合物。（5）坂口反應－鏈霉胍的特有反應 向鏈霉素的水解產(chǎn)物鏈霉胍與NaBrO2反應得產(chǎn)物1；8-羥基喹啉也和NaBrO2反應得產(chǎn)物2。產(chǎn)物1和產(chǎn)物2再相互作用生成橙紅色化合物。,藥學院藥物分析教研室,紫紅,麥芽酚,,藥學院藥

38、物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,（六）色譜法,（1）TLC法：硫酸慶大霉素的鑒別 點樣：供試液：展開、涼干、碘蒸氣中顯色 對照液 判斷：供試液與對照液所顯斑點的顏色與位 置應一致。 點樣：供試液 對照液①：硫酸鏈霉素標準品 對照液②：硫酸鏈霉素標準品 + 硫酸 新霉素標準品+ 硫酸卡那霉素標準品,

39、藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,判定法：供試液中主斑點的位置、顏色、大小 應與對照液① 相同， 對照液②應顯示分離清晰的3個斑點 否則試驗無效。（2）HPLC法：硫酸慶大霉素的鑒別 比較供試液與對照液各組分的保留時間。（七）光譜法 IR法, UV法BP（2005）慶大霉素,藥學院藥物分析教研室,www.them

40、egallery.com,Company Logo,三、特殊雜質(zhì)的檢查（1）鏈霉素中鏈霉素B的檢查－TLC法硅膠G板（使用前需活化）、展開劑 甲苯-冰乙酸-甲醇（50: 25: 25）、0.2％二羥萘的乙醇－20％硫酸混合液（2）慶大霉素中組分C的檢查－衍生化后HPLC色譜柱、流動相、檢測波長、衍生化條件的摸索 組分C的毒副作用和耐藥性與慶大霉素有差異，導致產(chǎn)品的效價和臨床療效,藥學院藥物分析教研室,www.themeg

41、allery.com,Company Logo,+,+,4,10,.,pH,吲哚衍生物,巰基醋酸,鄰苯二醛,氨基,,λmax = 330nm,衍生化原理,1.,,,藥學院藥物分析教研室,1-烷基硫代-2-烷基異吲哚衍生物,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,RP－HPLC,規(guī)定 C1 25~50% C1a

42、 15~40% C2a +C2 20~50%,峰面積歸一化法,藥學院藥物分析教研室,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,微生物檢定法 各國藥典主要采用,,HPLC法 常用于體內(nèi)藥分,,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,,氨基糖苷類抗生素的效價測定主要有微生物檢定法和HP

43、LC法。氨基糖苷類抗生素的HPLC測定法可分為離子交換(酸性條件下在陽離子交換柱上分離)、離子對(以烷基磺酸鹽為反離子)和反相HPLC法，由于本類抗生素多數(shù)無紫外吸收， 不能直接用紫外或熒光檢測器，需進行柱前或柱后衍生化，或采用電化學檢測器、蒸發(fā)光檢測器檢測。ChP2010采用HPLC-蒸發(fā)光散射法測定硫酸卡那霉素、硫酸依替米星等藥物的含量。,www.themegallery.com,Company Logo,,第四部分：四環(huán)素類抗生素

44、,Trtracyclines TC,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,一、理化特性（1）酸堿兩性－C4（二甲氨基）、C10（酚羥基）（2）旋光性－含有手性中心（一般為左旋）（3）紫外吸收特性－具有共軛雙鍵體系（吸收波長為長波方向）（4）與金屬離子的配位化合物反應－酚羥基和烯醇基（5）不穩(wěn)定性－對各種外界條件，包括氧化劑、酸、堿，易形成差向、脫水和異四環(huán)素，顏色加深,藥學

45、院藥物分析教研室,弱酸性環(huán)境,,ETC,差向四環(huán)素,藥學院藥物分析教研室,強酸性環(huán)境,,ATC,脫水四環(huán)素,藥學院藥物分析教研室,堿性環(huán)境,,EATC,異四環(huán)素差向脫水四環(huán)素,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company L

46、ogo,鹽酸土霉素的鑒別,EDTA 克服痕量金屬造成的 拖尾現(xiàn)象(四)IR和UV,比較保留時間,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,(一) 有關(guān)物質(zhì) 四環(huán)素類抗生素中的有關(guān)物質(zhì)主要是指在生產(chǎn)和貯存過程中易形成的異構(gòu)雜質(zhì)、降解雜質(zhì)(ETC、ATC、EATC)等。ChP2010、USP34-NF29和BP2010均采用HPLC法控制四環(huán)素類抗生素中的有關(guān)物質(zhì)

47、。,三、雜質(zhì)檢查,www.themegallery.com,Company Logo,(二) 雜質(zhì)吸光度 四環(huán)類抗生素多為黃色結(jié)晶性粉末；而異構(gòu)體、降解產(chǎn)物顏色較深，如差向四環(huán)素為淡黃色，因其不穩(wěn)定又易變成黑色；脫水四環(huán)素為橙紅色；差向脫水四環(huán)素為磚紅色。此類雜質(zhì)的存在均可使四環(huán)素類抗生素的外觀色澤變深。因此和BP2010均規(guī)定了一定溶劑、一定濃度、一定波長下雜質(zhì)吸光度的限量。,www.themegallery.com,Com

48、pany Logo,ChP2010規(guī)定的鹽酸四環(huán)素的雜質(zhì)吸光度測定方法：取本品，在20～25℃時加0.8%氫氧化鈉溶液制成每1ml中含10mg的溶液，置4cm的吸收池中，自加0.8%氫氧化鈉溶液起5分鐘時，在530nm的波長處測定，其吸光度不得過0.12(供注射用)。,www.themegallery.com,Company Logo,(三) 殘留有機溶劑 一些四環(huán)素類藥物需要控制殘留有機溶劑，如ChP和BP規(guī)定鹽酸多西環(huán)素

49、檢查乙醇，限量均為4.3%～6.0%。,www.themegallery.com,Company Logo,HPLC法,鹽酸四環(huán)素的測定 系統(tǒng)適用性試驗：鹽酸四環(huán)素、有關(guān) 物質(zhì)及ATC峰間的 分離度均應符合要 求。 定量方法：外標法以峰面積計。,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.c

50、om,Company Logo,第五節(jié) 抗生素類藥物中高分子 雜質(zhì)的檢查,1.高分子雜質(zhì) 分子量大于藥物本身的雜質(zhì)總稱。,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,蛋白、多肽、多糖或抗生素與蛋白、多肽、多糖的結(jié)合物。主要來自于發(fā)酵工藝，致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽。 藥物的自身聚合物，來自于生產(chǎn)、貯存過程

51、?？梢l(fā)過敏。,外源性雜質(zhì),內(nèi)源性雜質(zhì),藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,2、基本特點－對青霉素而言,青霉噻唑多肽－外源性的（2400～3500）青霉素聚合物－內(nèi)源性的（聚合度） 母核參與的聚合反應－N型聚合反應 側(cè)鏈參與的聚合反應－L型聚合反應,,分類,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,（1）生產(chǎn)過程中的任何蛋白或碎片

52、都可帶入產(chǎn)品中，易與藥物形成多肽類雜質(zhì)（2）形成的聚合物也可發(fā)生不同程度的降解（3）異構(gòu)體之間可以相互聚合－L-L、D-D、L-D（4）高分子雜質(zhì)與生產(chǎn)工藝密切相關(guān),,特點,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,高分子雜質(zhì)的控制方法,（1）高效液相色譜法（2）凝膠色譜－自身對照外標法 Sephadex G-10（3）離子交換色譜,凝膠色譜法：利用凝膠的分子篩作用，讓藥物分子自

53、由的進入到凝膠顆粒內(nèi)部，而高分子雜質(zhì)被排阻的原理進行的。故此大分子則先流出色譜柱，小分子后出峰而得以分離。,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,高分子雜質(zhì)的分析方法,（1）藍色葡聚糖在高分子分離中的 N＞2500/m，拖尾因子0.75～1.5（2）峰面積的RSD＜5％,,色譜適用性條件,HPLC系統(tǒng)簡單測定系統(tǒng),,分析方法,藥學院藥物分析教研室,www.themegalle

54、ry.com,Company Logo,練習與思考,[A型題],1. 硫酸鏈霉素、硫酸青大霉素的鑒別方法是A.三氯化鐵反應 B. 硫色素反應 C. 茚三酮反應 D.與堿性酒石酸銅試液反應 E. 雙縮脲反應,www.themegallery.com,Company Logo,2. 青霉素鈉《中國藥典》2010規(guī)定的含量測定方法為A.非水溶液滴定法 B.旋光法 C.HPLC法

55、 D.紫外分光法 E.汞量法,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,[B型題],A.焰色反應 B.硫色素反應 C.硝酸反應 D. 三氯化銻反應 E. 麥芽酚和坂口反應反應 1.青霉素鈉 2. 硫酸鏈霉素 3. 維生素B1 4. 維生素A,A,E,B,D,藥學院藥物分析教研室,

56、www.themegallery.com,Company Logo,,,,[X型題],1. 可以用汞量法測定的藥物有A。青霉素鈉 B. 青霉素V鉀 C. 維生素C D. 青霉素V鉀片 E. 維生素C注射液,藥學院藥物分析教研室,www.themegallery.com,Company Logo,,,,2. 可用微生物法測定含量的藥物有A．硫