藥物的雜質(zhì)檢查

1、第三章 藥物的雜質(zhì)檢查,,——藥物分析多媒體,,,,3,第一節(jié) 概 述,一、藥物的純度要求 藥物：預(yù)防、治療、診斷人的疾病，有目的地調(diào)節(jié)人的生理機(jī)能，并且有適應(yīng)癥、用法、用量規(guī)定的 物質(zhì)，如化學(xué)藥品、抗生素、中藥材、中藥飲片、中成藥、生物制劑、生化藥品、血漿制品、血液制品、診斷藥品等。,藥物的雜質(zhì)是指藥物中存在于藥物中的無(wú)治療作用、或影響藥物的穩(wěn)定性和療效、甚至對(duì)人體健康有害的物質(zhì)。即：1. 有毒副

2、作用的物質(zhì)2. 本身無(wú)毒副作用，但影響藥物的穩(wěn)定性和療效的物質(zhì)3. 本身無(wú)毒副作用，也不影響藥物的穩(wěn)定性和療效，但影響藥物的科學(xué)管理的物質(zhì)。,藥物中存在有害的雜質(zhì)：如砷鹽、鉛鹽等； 影響藥物穩(wěn)定性的，如水分能促進(jìn)青霉素鈉鹽、鉀鹽水解，降低療效； 有的對(duì)人體無(wú)害、對(duì)藥物的穩(wěn)定性也沒(méi)有影響，如一般雜質(zhì)檢查中的氯化物。檢查藥物中雜質(zhì)不僅是保障用藥安全、有效，而且也可用來(lái)考核生產(chǎn)工藝和企業(yè)管理是否正常、借以全

3、面保證和提高藥物質(zhì)量。,藥物的純度即藥物的純凈程度，是反應(yīng)藥品質(zhì)量的一項(xiàng)重要指標(biāo)。藥物的純度主要由藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的“檢查”項(xiàng)下的雜質(zhì)檢查來(lái)控制，內(nèi)容包括可能存在的雜質(zhì)名稱(chēng)、相應(yīng)的檢查項(xiàng)目、檢查方法和允許限量。 藥品純是相對(duì)的，不純是絕對(duì)的。在藥品的純度設(shè)定時(shí)有兩個(gè)依據(jù)： A藥品制造水平；B雜質(zhì)的性質(zhì)（是否有毒性）。優(yōu)質(zhì)藥品的純度高必須具備： A治療效果好；B安全性高； C副作用、毒性低；D藥品制造成

4、本不增加。假藥：變質(zhì)不能藥用的；所含成分與標(biāo)準(zhǔn)不符（藥典不符）；以彼藥品代替此藥品的；以非藥品代替藥品的。劣藥：藥品中所含成分的數(shù)量與標(biāo)準(zhǔn)不符；超過(guò)有效期，低限投料，一般合格為95%~105%。,藥品標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下除了雜質(zhì)檢查外，還有有效性、安全性和制劑的檢查。 有效性的檢查：指與藥物療效有關(guān)，但在鑒別、純度檢查和 含量測(cè)定中不能控制的項(xiàng)目。如氫氧化鋁的制酸力，諾氟沙星的含氟檢查等。 安全性檢查：有異常毒性、熱原、降壓物

5、質(zhì)、無(wú)菌檢查等。在藥物制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，還需要檢查是否達(dá)到了制劑學(xué)方面的有關(guān)要求，如重量差異，崩解時(shí)限，融變時(shí)限，含量均勻度等。,二、雜質(zhì)的來(lái)源與種類(lèi),(一) 雜質(zhì)的來(lái)源 1. 生產(chǎn)過(guò)程引入的雜質(zhì)； A、合成藥生產(chǎn)過(guò)程中未反應(yīng)的原料、反應(yīng)中間體、副產(chǎn)物，在精制過(guò)程中未能完全除去，就會(huì)成為產(chǎn)品中的雜質(zhì)；B、殘留的有機(jī)溶劑、試劑以及器具引入的無(wú)機(jī)雜質(zhì)；C、有的藥物是從植物中提取的，由于植物中常含有與藥物結(jié)構(gòu)、性質(zhì)相近的物質(zhì)，在

6、提取過(guò)程中，分離不完全，這些物質(zhì)可能會(huì)因引入藥物中；D、藥物在制成制劑的過(guò)程中，也可能產(chǎn)生新的雜質(zhì)，如鹽酸普魯卡因。,2. 貯藏過(guò)程引入的雜質(zhì)：受外界條件的影響，可能發(fā)生水解、分解、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)變、聚合、潮解、發(fā)霉等變化，使藥物中產(chǎn)生新的雜質(zhì)。A、氧化反應(yīng)：具有酚羥基、烯醇、亞硝酸基以及醚、醛、共軛雙鍵等結(jié)構(gòu)藥物在空氣、日光作用下易氧化分解而產(chǎn)生雜質(zhì)，藥效損失，而且可能產(chǎn)生顏色或沉淀，有些藥物即使被氧化少量，但色澤變深或產(chǎn)生不良?xì)?/p>

7、味，嚴(yán)重影響藥物的質(zhì)量，甚至變?yōu)閺U品。B、水解反應(yīng)是藥物最容易發(fā)生的變質(zhì)反應(yīng)；,C、一些藥物存在異構(gòu)體或多晶型，它們多數(shù)的生物活性有很大差異，如氯霉素；D、微生物引起的：注射液中存在熱原質(zhì)，滴眼液中存在綠膿桿菌；另外糖類(lèi)、蛋白質(zhì)類(lèi)、脂類(lèi)、有機(jī)聚合物易被微生物作用，以及一些化學(xué)合成的有機(jī)藥物能降解。,易發(fā)生水解反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：,酯、內(nèi)酯、酰胺、鹵代烴、苷類(lèi)等,易發(fā)生氧化反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：,醚、醛、酚羥基、巰基、亞硝基、雙鍵等,(二) 雜質(zhì)的種類(lèi)

8、,藥物中的雜質(zhì)按來(lái)源分為1. 一般雜質(zhì)：廣泛存在于多種藥物的生產(chǎn)或貯藏過(guò)程中，引入的雜質(zhì)如氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、酸、堿、水分、易炭化物、熾灼殘?jiān)?、干燥失重、有機(jī)溶劑殘留量等。一般雜質(zhì)其檢查方法收載在中國(guó)藥典的附錄中。,2. 特殊雜質(zhì)：指某一個(gè)或某一類(lèi)藥物的生產(chǎn)或貯藏過(guò)程中引入的雜質(zhì)，如阿司匹林中的游離水楊酸、異煙肼中的游離肼、甾體激素中的其他甾體。特殊雜質(zhì)檢查方法收載在中國(guó)藥典正文各藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。,（三）藥物的純度與

9、化學(xué)試劑的純度,藥物的純度考慮雜質(zhì)的生理作用，藥品只有兩個(gè)等級(jí)：合格或不合格。 化學(xué)試劑有很多等級(jí)，如基準(zhǔn)試劑、優(yōu)級(jí)純（GR）、分析純（AR）、化學(xué)純（CP）、超純?cè)噭?、超凈高純?cè)噭⑸V純、光譜純；按其用途可分為通用試劑、基準(zhǔn)試劑、分析試劑、儀器分析試劑（色譜純、光譜純）、有機(jī)合成試劑、臨床診斷試劑和特種試劑等。,例. 臨床所用藥物的純度與化學(xué)品及試劑純度的主要區(qū)別A. 所含雜質(zhì)的生理效應(yīng)不同B. 所含有效成分的量

10、不同 C. 所含雜質(zhì)的絕對(duì)量不同D. 化學(xué)性質(zhì)及化學(xué)反應(yīng)速度不同E. 所含有效成分的生理效應(yīng)不同,,三、雜質(zhì)的限量檢查,雜質(zhì)的限量（L）：在不影響藥物的療效和不發(fā)生毒性的前提下，允許藥物中存在有一定量的雜質(zhì)。這一允許量被稱(chēng)為雜質(zhì)限量。根據(jù)定義，藥物中雜質(zhì)的限量可按照下式來(lái)計(jì)算： 當(dāng)供試品(S)中所含雜質(zhì)的限量（L）是通過(guò)與一定量的雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行比較來(lái)確定時(shí),雜質(zhì)的最大允許量可由雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(C

11、)與體積(V)的乘積獲得,上式可以表達(dá)為:,,,×100%,,×100%,(一）藥物的雜質(zhì)檢查法 1. 對(duì)照法 限量檢查法 （Limit Test） 特點(diǎn)：不需知道雜質(zhì)的準(zhǔn)確含量,2. 靈敏度法 系指在供試品溶液中加入試劑，在一定反應(yīng)條件下，不得有正反應(yīng)出現(xiàn)。 特點(diǎn)：不需對(duì)照品 3. 比較法 含量測(cè)定法：測(cè)定雜質(zhì)的絕對(duì)含量，如測(cè)定吸收度、pH值等。 特點(diǎn)：準(zhǔn)確測(cè)定雜質(zhì)

12、的量，不需對(duì)照品。,4、儀器：納氏比色管；5、反應(yīng)的靈敏度：反應(yīng)條件；不應(yīng)該發(fā)生的反應(yīng)；6、注意事項(xiàng)： A供試品與標(biāo)準(zhǔn)液的單位統(tǒng)一； B供試品是否稀釋?zhuān)♂尡稊?shù)是多少？ C限量表示方法：%；ppm D求限量的目的。,示例一： 對(duì)乙酰氨基酚中氯化物檢查：取對(duì)乙酰氨基酚2.0g，加水100ml時(shí)，加熱溶解后冷卻，濾過(guò)，取濾液25ml，依法檢查氯化物（ChP附錄），所發(fā)生的

13、渾濁與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉5.0ml（每1ml相當(dāng)于10?g的Cl-）制成的對(duì)照液比較，不得更濃。問(wèn)氯化物的限量是多少？示例二： 磷酸可待因中嗎啡檢查：取本品0.10g，加鹽酸溶液（9?1000）使溶解成5ml，加亞硝酸鈉試液2ml，放置15min，加氨試液3ml，所顯顏色與嗎啡[取無(wú)水嗎啡2.0mg，加鹽酸溶液（9?1000）使溶解成100ml] 5.0ml用同一方法制成的對(duì)照液比較，不得更深。問(wèn)限量為多少？,檢查某藥物中的砷鹽

14、，取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml（每1ml相當(dāng)于1μg的As）制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑，砷鹽限量為0.0001％，應(yīng)取供試品的量為檢查維生素C中的重金屬時(shí)，若取樣量為1.0g，要求含重金屬不得過(guò)百萬(wàn)分之十，問(wèn)應(yīng)吸取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（每1ml＝0.01mg的Pb）多少ml？,注：1、藥典中藥品對(duì)于其規(guī)定的各種雜質(zhì)檢查項(xiàng)目，系指該藥品在按既定工藝進(jìn)行和 正常貯藏中可能含有或產(chǎn)生并需要控制的雜質(zhì)，而ChP中未規(guī)定檢查的雜質(zhì)，主要是因?yàn)樵谡Ｉa(chǎn)和貯藏過(guò)程中不可能引入

15、，或雖有引入但含量甚微，對(duì)人體無(wú)不良影響也不影響藥物質(zhì)量，故不予檢查。2、凡ChP未規(guī)定檢查的雜質(zhì)，一般不需要檢查，但遇特殊情況，如發(fā)現(xiàn)外觀性狀不正常；藥廠在生產(chǎn)上改變了原料或方法工藝時(shí)；工藝出現(xiàn)故障，投料出錯(cuò)等都根據(jù)實(shí)際情況檢查可能引入的雜質(zhì)。,一、般雜質(zhì)檢查規(guī)則《藥品檢驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定： 1. 遵循平行操作原則（1）儀器的配對(duì)性 如納氏比色管應(yīng)配對(duì)，刻度線高低相差不超過(guò)2mm，砷鹽檢查時(shí)導(dǎo)氣管長(zhǎng)度及孔的大小要一致（2

16、）對(duì)照品與供試品的同步操作,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,2. 正確的取樣及供試品的稱(chēng)量范圍 ≤1g不超過(guò)±2%，＞1g不超過(guò)±1% 3. 正確的比色、比濁方法4. 檢查結(jié)果不符合規(guī)定或在限度邊緣時(shí)應(yīng)對(duì)供試管和對(duì)照管各復(fù)查二份,一、氯化物檢查法原理：中國(guó)藥典對(duì)氯化物的檢查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀白色渾濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在相同條件下生成的氯化銀渾濁液比較，濁度不得更大。

17、 樣品管：Ag++Cl-→AgCl（白色渾濁） 標(biāo)準(zhǔn)管： Ag++Cl-→AgCl（白色渾濁） 樣品管濁度＞標(biāo)準(zhǔn)管濁度，樣品不合格 樣品管濁度 ＜標(biāo)準(zhǔn)管濁度，樣品合格,方法：取兩支50ml納氏比色管：樣品管用水溶解，使呈中性 稀硝酸10ml 水40ml 硝酸銀1.0ml 水 50ml標(biāo)準(zhǔn)管 10ug/mlCl- 稀硝酸10m

18、l 水40ml 硝酸銀1.0ml 水 50ml搖勻，暗處放置5min在黑色背景下，從上向下觀察，進(jìn)行比較。比色：白色背景，由上向下（透射光的強(qiáng)弱）比濁：黑色背景，由上向下（散射光的 強(qiáng)弱）例：ChP中：無(wú)水葡萄糖中氯化物檢查： S=0.60g，V=6.0ml，C=10ug/ml，求限量L L=（V?C/S）×100%=0.010%,討論：1．AgCl易

19、感光，變成灰紫色，所以放置時(shí)避免直射日光，比較時(shí)背景為黑色。2．溫度30—40℃時(shí)比濁度最大，實(shí)際檢查時(shí)不控制溫度，室溫，平行操作。3．最適檢出濃度為：0.05—0.08mg/50ml，標(biāo)準(zhǔn)NaCl為10ug/ml。4．干擾物排除：供試品不澄清，用含硝酸的蒸餾水洗滌濾紙后再過(guò)濾。5．硝酸環(huán)境的目的：①加速AgCl渾濁的生成，產(chǎn)生較好的濁度；②加硝酸阻止CO32-、PO43-與Ag+反應(yīng)，產(chǎn)生干擾。,6．若供試品有顏色，排除干擾方

20、法有：①外消色法（加入一定濃度稀焦糖溶液調(diào)色）；②內(nèi)消色法：方法如下： 供試品兩等份：一等份加入AgNO3后反復(fù)過(guò)濾除Cl-后加水40ml，加入標(biāo)準(zhǔn)NaCl液，和硝酸銀試液后，補(bǔ)水至50ml——標(biāo)準(zhǔn)管。 一等份加水40ml后，硝酸銀試液后，補(bǔ)水至50ml——供試管。 如：枸櫞酸鐵銨中氯化物的檢查。 （2）外消色法：如高錳酸鉀中氯化物的檢查，可先加乙醇適量，使其還原褪色后再依法檢查。,7 ．加入試劑順序應(yīng)

21、按規(guī)定進(jìn)行，速度易慢，做成40ml后加硝酸銀的原因：如樣品中氯離子濃度大時(shí)，會(huì)產(chǎn)生大量AgCl，而不是以渾濁形式存在于溶液中，到40ml時(shí)，生成渾濁。8 ．濃硝酸對(duì)人體有害，多先稀釋后再用，（1→5）。9 ．有Br-、I-存在時(shí)，與Ag+反應(yīng)，預(yù)處理 加入酸和H2O2，加熱煮沸，除去Br-、I- 。10 ．如為有機(jī)氯雜質(zhì)結(jié)構(gòu)，在堿性溶液中加熱水解，形成NaCl，再依法檢查。,（1）加水振搖，過(guò)濾，取濾液進(jìn)行檢查。 （2）加熱，放

22、冷，過(guò)濾，取濾液進(jìn)行檢查。（3）溶于有機(jī)溶劑如稀乙醇、丙酮，可加稀乙醇或丙酮溶解后進(jìn)行檢查。,11. 不溶于水的有機(jī)藥物,二、硫酸鹽檢查法,原理: 藥物中存在的微量硫酸鹽與氯化鋇在鹽酸酸性介質(zhì)中生成硫酸白色渾濁,與一定兩標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液在相同條件下生成的渾濁比較,濁度不得更大.方法: 供試品----水溶解成約40ml (溶液堿性可加鹽酸使成中性,溶液不澄清,濾過(guò))----置50ml納氏比色管中----加鹽酸2ml,搖勻--

23、--得供試品溶液. 標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液----置50ml納氏比色管中----加水使成約40ml----加稀鹽酸2ml,搖勻----得對(duì)照品溶液. 于供試品與對(duì)照品溶液中,分別加如25%氯化鋇溶液5ml,用水稀釋至50ml,充分搖勻,放置10min,置黑色背景下,從比色管上方向下觀察,比較.,討論：1、HCl的作用：防止BaCO3、Ba3（PO4）2沉淀的生成，所用HCl濃度小于10M，過(guò)強(qiáng)酸則靈敏

24、度降低，pH=1時(shí)為宜。2、供試品有色：處理方法同Cl-檢查。內(nèi)消色法和外消色法，先用HCl呈酸性的水洗凈濾紙中硫酸根。,三、鐵鹽檢查法,(一) 硫氰酸鹽法原理: 鐵鹽在鹽酸酸性溶液中月硫氰酸銨生成紅色可溶性硫氰酸鐵配位離子,再與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后所呈的顏色進(jìn)行比較,顏色不得更深.方法: 供試品----加水溶解使成25ml----置于50ml納氏比色管中----加稀鹽酸4ml與過(guò)硫酸銨50mg----加水稀釋

25、至35ml----加30%硫氰酸銨溶液3ml----加水成50ml----如顯色,立即與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液一定量按相同方法制成的對(duì)照品比較.注意事項(xiàng): 實(shí)驗(yàn)前供試品處理某些藥物(如葡萄糖、糊精和硫酸鎂）在檢查過(guò)程中需加硝酸處理，則不再加過(guò)量硫酸銨，但必須加熱煮沸除去氧化氮.,討論：1、加稀HCl的目的：防止鐵鹽水解，避免弱酸鹽的干擾，如醋酸根，磷酸根，砷酸鹽等；2、加入過(guò)硫酸銨的目的：氧化供試品中亞鐵離子成為鐵離子。同時(shí)防止光線作用

26、使鐵氰酸根分解或還原；某些藥物如葡萄糖、糊精、MgSO4、NaHCO3中鐵檢查時(shí)加入濃硝酸加熱煮沸，氧化亞鐵離子。3、最適檢出濃度：10-50μ g Fe/50ml；4、干擾物的排除：樣品管與標(biāo)準(zhǔn)管顏色不一致，顏色很淺時(shí)用20ml正丁醇提取后觀察正丁醇層顏色的深淺；具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機(jī)藥物，如鹽酸普魯卡因中Fe檢查時(shí)，需要灼燒破壞后加HCl溶解檢查。,(二) 巰基醋酸法原理: 巰基醋酸還原三價(jià)鐵離子為二價(jià)鐵離子,在氨堿性溶液

27、中進(jìn)一與二價(jià)鐵離子作用生成紅色配位離子,與一定量標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)同法處理后產(chǎn)生的顏色進(jìn)行比較,以限制鐵的量.注意事項(xiàng): 在加巰基醋酸試液前,先加入20%枸櫞酸溶液2ml,使枸櫞酸與鐵離子形成配位離子,以免在氨堿性溶液中產(chǎn)生氫氧化鐵沉淀.,（二）巰基醋酸法 BP（1998） 對(duì)照法,本法靈敏度較高，但試劑較貴,,四、重金屬檢查法,重金屬系指在實(shí)驗(yàn)條件下能與S2-作用顯色的金屬雜質(zhì)，如Ag、Hg、Pb、Cu、Cr、Sn

28、、Sb、Bi等，Pb在生產(chǎn)中遇到機(jī)會(huì)多，以及體內(nèi)易蓄積原因，故檢查時(shí)以Pb為代表。顯色劑：H2S、硫代乙酰胺、Na2S。H2S的缺點(diǎn)：有毒、惡臭、環(huán)境污染、易分解。重金屬檢查在ChP中有四法。,（一）第一法 硫代乙酰胺法,1. 原理 對(duì)照法,適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物。,適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物。,2. 測(cè)定條件,（1）用硝酸鉛配制標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液（加硝酸防止Pb2+水解），標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液臨用前稀釋而成，標(biāo)準(zhǔn)硝酸鉛溶液10?

29、g Pb2+/ml，適宜比色范圍為27ml溶液中含10～20?g的Pb2+。 （2）本法用2ml pH3.5的醋酸鹽緩沖液控制溶液pH值為3～3.5，偏強(qiáng)酸呈色變淺；太強(qiáng)酸不顯色。 （3）顯色劑：從ChP（1990）開(kāi)始改用硫代乙酰胺做顯色劑，無(wú)惡臭、濃度易控制、與H2S同效；,3. 干擾及排除（1）供試品如有色，需經(jīng)處理后方可檢查。 外消色法：在對(duì)照管中加稀焦糖溶液或其他無(wú)干擾的有色溶液。 B. 內(nèi)消色法：加入其他無(wú)干擾的

30、有色物質(zhì) C. 改用第四法，微孔濾膜過(guò)濾法,（2）若供試品中有微量Fe3+存在，會(huì)氧化硫化氫生成單質(zhì)硫，干擾比色，加入抗壞血酸或鹽酸羥胺（0.5～1.0g）還原Fe3+為Fe2+，可消除干擾。（3）若供試品為鐵鹽，F(xiàn)e3+在鹽酸中生成HFeCl ，用乙醚提取除去，剩余微量鐵在氨堿性溶液中，加KCN掩蔽，然后用第三法檢查。,（4）若藥物本身能生成不溶性硫化物時(shí)，可加入掩蔽劑消除干擾。如ZnSO4中重金屬的檢查，要在堿性下加KCN

31、掩蔽Zn2+后，依第三法檢查。,（二）第二法 熾灼殘?jiān)?適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及不溶于水、稀酸、乙醇及堿的有機(jī)藥物。,500～600℃熾灼后的殘?jiān)?，?jīng)處理后，依一法檢查。,1. 原理 對(duì)照法,2. 操作方法,含鈉及氟的有機(jī)藥物應(yīng)用鉑坩堝、石英坩堝或硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿（因可腐蝕瓷坩堝，帶入大量重金屬）,（三）第三法 硫化鈉法,適用于溶于堿而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物。如磺胺類(lèi)、巴比妥類(lèi)。,1. 原理 對(duì)照法,2. 測(cè)定條件

32、（1）NaOH堿性條件下（2）顯色劑：硫化鈉,（四）第四法 微孔濾膜法： 適用于重金屬限量低的藥物。,適用于含2～5?g重金屬雜質(zhì)及有色供試液的檢查。 依一法檢查，結(jié)果微孔濾膜過(guò)濾后比較色斑。 因重金屬限量低時(shí)，用納氏比色管難以觀察比較，改用微孔濾膜法。,遇HgBr2試紙生成黃色～棕色的砷斑，與2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液在相同條件下生成的砷斑比較。,1. 原理

33、 對(duì)照法,五、砷鹽檢查法,古蔡法檢砷裝置,A 為100ml標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶，B 為中空的標(biāo)準(zhǔn)磨口塞，上連導(dǎo)氣管C (外徑 8.0mm，內(nèi)徑6.0mm)，全長(zhǎng)約180mm。D 為具孔的有機(jī)玻璃旋塞，其上部為圓形平面，中央有一圓孔，孔徑與導(dǎo)氣管C的內(nèi)徑一致，其下部孔徑與導(dǎo)氣管C的外徑相適應(yīng)。將導(dǎo)氣管C的頂端導(dǎo)入旋塞下部孔內(nèi)，并使管壁與旋塞的圓孔恰相吻合，粘合固定，E 為中央具有圓孔(孔徑6.0mm

34、)的有機(jī)玻璃旋塞蓋，與D緊密吻合。 測(cè)試時(shí)，于導(dǎo)氣管C中裝入醋酸鉛棉花60mg(裝管高度約60～80mm)，再于旋塞D的頂端平面上放一片溴化汞試紙(試紙大小以能覆蓋孔徑而不露出平面外為宜)，蓋上旋塞E并旋緊，即得。,,,標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備：精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，立即照上法裝妥的導(dǎo)氣管C密塞于A瓶上，并將A瓶置25

35、～40℃水浴中，反應(yīng)45分鐘后，取出溴化汞試紙，即得。 供試砷斑的制備： 取本品5.0g ，置檢砷瓶中，加水23ml溶解后，加鹽酸5ml，照標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備，自“加碘化鉀試液5ml”起，依法操作，將生成的砷斑與標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較，不得更深。,反應(yīng)中試劑及樣品：藥物、KI、酸性SnCl2、HCl、Zn；醋酸鉛棉花、溴化汞試紙?jiān)噭┳饔茫捍姿徙U棉花：排除H2S的干擾； SnCl2：使As5+→ As3+

36、；使I2 → I-；生成鋅錫齊； KI：使As5+→ As3+；絡(luò)合Zn2+ 溴化汞試紙遇AsH3顯黃、棕色砷斑。反應(yīng)靈敏度：1μ g/ml就可檢出。,試劑的作用： 合格 ＜ ① KI、SnCl2的作用：交替還原作用；首先將AsO43-還 原成AsO33-，生成的碘再被還原成碘離子。,AsO43- + 2I- +2H+

37、 AsO33- + I2 + H2O AsO43- + Sn2+ + 2H+ AsO33- + Sn4++ H2O I2 + Sn2+ 2I- + Sn4+ 4I- + Zn2+ [ZnI4]2-,,,,,② Zn粒與氯化亞錫作用，在其面上形成Zn-

38、Sn齊，起 去極化作用。 ③ Pb(AC)2棉的作用是消除供試品可能含有的少量的硫 化物。 S2- + 2H+ H2S H2S + HgBr2 2HBr + HgS （汞斑） H2S + Pb(AC)2 PbS + 2HAC,,,,干擾物的排除：1、硫化物的排除：加入濃硝酸；2、藥物中

39、如有Fe3+，先加入SnCl2，生成Fe2+后再加入其他試劑；3、共價(jià)鍵結(jié)合有機(jī)藥物：先堿破壞或先酸破壞后再檢查；4、Sb（銻干擾）：改用白田道夫法：如葡萄糖銻鈉中砷鹽檢查；古蔡氏法中注意事項(xiàng)：檢砷管的口徑一樣大小；拿檢砷瓶的下端；加Zn粒前，要把管中棉花和HgBr2試紙準(zhǔn)備好，棉花松緊適宜。（1）供試品為S2-,SO32-, S2O32-等: 因在酸中生成H2S,SO2,與HgBr作用生成HgS或Hg，干擾砷斑檢查。用硝酸氧

40、化成硫酸鹽可消除。（2）供試品為Fe3+ 能消耗KI，SnCl2 應(yīng)測(cè)定條件，先可加足量KI。,(二) 二乙基二硫代氨基甲酸銀法(Ag(DDC)法)原理: 金屬鋅與酸作用,產(chǎn)生新生態(tài)的氫,與微量砷鹽反應(yīng),生成具有揮發(fā)性的砷化氫;遇二乙基二硫代氨基甲酸銀,使其還原產(chǎn)生紅色的膠態(tài)銀,用目視比色法或在510nm處波長(zhǎng)出測(cè)定吸收度,再與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液用同法處理后得到的有色溶液進(jìn)行比較.優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，0.5μ g/ml就可檢出；

41、重現(xiàn)性好；能消除銻干擾；缺點(diǎn)：吡啶惡臭。,六、溶液顏色檢查法,(一) 目視比色法 方法: 規(guī)定量藥品,加水溶解,置于納氏比色管中,加水稀釋至10ml.另取規(guī)定色調(diào)和色號(hào)的比色液10ml,置于納氏比色管中,兩管同置白色背景上,自上向下透視或平視觀察,供試品管呈現(xiàn)顏色與對(duì)照管比較,不得更深.標(biāo)準(zhǔn)比色液配制：K2Cr2O7（0.8mg/ml），CuSO4（62.40mg/ml），CoCl2（59.50mg/ml）。配制成黃綠

42、、黃、橙黃、橙紅、棕紅五種貯備液，各可稀釋成10個(gè)色號(hào)。,標(biāo)準(zhǔn)比色液的配制,(二) 分光光度法(三) 色差計(jì)法 本法是通過(guò)色差計(jì)直接測(cè)定溶液的透視三刺激值，對(duì)其顏色進(jìn)行定量表述和分析的方法。,七、易炭化物檢查法,易炭化物檢查法是檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化的微量有機(jī)雜質(zhì)。方法： 取內(nèi)徑一致的比色管兩支：甲管中加各項(xiàng)下規(guī)定對(duì)照液5ml；乙管中加硫酸5ml后，分次緩緩加入規(guī)定量的供試品，振搖使溶解。除另有規(guī)定外，靜置15min后

43、，將甲乙兩管同置白色背景前，平視觀察，乙管中所顯顏色不得較甲管更深.,對(duì)照液：（1）“溶液顏色檢查”項(xiàng)下的標(biāo)準(zhǔn)比色液；（2）由比色用氯化鈷液，比色用重鉻酸鉀液，比色用硫酸銅液按規(guī)定方法配成的對(duì)照液；比色：同置白色背景前，平視觀察比較。,八、溶液澄清度檢查法,澄清度可反映藥物溶液中的微量不溶性雜質(zhì)的存在情況。原理:10%烏洛托品在偏酸性條件下水解產(chǎn)生甲醛，甲醛與1.00%硫酸肼縮合生成不溶于水的甲醛腙白色混濁。方法:在室溫條件下

44、，將用水稀釋至一定濃度的供試品溶液與等量的濁度標(biāo)準(zhǔn)液分別置于配對(duì)的比濁用玻璃管中，在濁度標(biāo)準(zhǔn)液制備后，在暗室內(nèi)垂直同置于傘棚燈下，從水平方向觀察、比較，檢查溶液的澄清度或其混濁程度。注意事項(xiàng):多數(shù)藥物的澄清度檢查以水為溶劑，但也有用酸、堿或有機(jī)溶劑作溶劑的。供制備注射用的原料藥要檢查澄清度和溶液顏色。,九、溶液澄清度檢查法,檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)，用作注射劑的原料藥一般應(yīng)作此項(xiàng)檢查。,1. 檢查方法 對(duì)照法,,2. 濁度標(biāo)準(zhǔn)液的

45、配制,,中國(guó)藥典規(guī)定用濁度標(biāo)準(zhǔn)液作為澄清度檢查的標(biāo)準(zhǔn)。 反應(yīng)原理：烏洛托品在偏酸性條件下水解產(chǎn)生甲醛，甲醛與肼縮合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色渾濁。1.00％硫酸肼溶液與10％烏洛托品溶液等量混合配制濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液 濁度標(biāo)準(zhǔn)原液 濁度標(biāo)準(zhǔn)液（5個(gè)級(jí)號(hào)）,,3. 判斷 藥典中規(guī)定的“澄清”，系指供試品溶液的澄清度相同于所用溶劑，或未超過(guò)0.5號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液。 4. 溶

46、劑：水、酸、堿、有機(jī)溶劑 有機(jī)酸的堿金屬鹽類(lèi)藥物強(qiáng)調(diào)用“新沸過(guò)的冷水”。,檢查不含金屬的有機(jī)藥物或揮發(fā)性無(wú)機(jī)藥物中混入的無(wú)機(jī)雜質(zhì)(金屬氧化物或無(wú)機(jī)鹽類(lèi))。 1. 原理 樣品炭化后+ H2SO4濕潤(rùn)→700～800℃熾灼至恒重→熾灼殘?jiān)蛩峄曳郑?限量一般為0.1%～0.2%,十 、熾灼殘?jiān)鼨z查法,2. 操作方法,,,3. 注意事項(xiàng) 1）供試品的取樣量應(yīng)根據(jù)熾灼殘?jiān)蘖亢头Q(chēng)

47、量誤差決定。2）含氟的藥物對(duì)瓷坩堝有腐蝕，應(yīng)采用鉑坩堝。3）若殘?jiān)枇糇髦亟饘贆z查，則500～600℃熾灼至恒重。 4）加硫酸處理是使雜質(zhì)轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的硫酸鹽，并幫助有機(jī)物炭化。,注意事項(xiàng): 供試品的取用量應(yīng)根據(jù)熾灼殘?jiān)蘖亢头Q(chēng)重誤差決定。一般應(yīng)使熾灼殘?jiān)繛?mg—2mg,殘?jiān)蘖繛?.1%--0.2%。限量為 0.1%、0.05%、1%以上者，取樣量分別為 1g、2g、1g以下。恒重——指供試品連續(xù)兩次熾灼或干燥后的重量差異

48、在 0.3mg以下。,十、干燥失重測(cè)定法,干燥失重——藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所失的重量，以百分率表示。干燥應(yīng)至恒重。第二次及以后各次稱(chēng)重均應(yīng)干燥1h后進(jìn)行。干燥失重的內(nèi)容物指水分和其它揮發(fā)性物質(zhì)，如有機(jī)溶劑。四種測(cè)定方法：（一）常壓干燥法: 適于受熱較穩(wěn)定的藥物。干燥溫度一般為105度。（二）干燥劑干燥: 適于受熱分解，易于揮發(fā)的供試品。常用硅膠、硫酸和五氧化二磷。吸水效率：五氧化二磷>硅膠>硫酸,取供試品，

49、混合均勻(如為較大的結(jié)晶，應(yīng)先迅速搗碎，使成2mm以下的小粒)。分取約lg，平鋪在130℃干燥至恒重的扁形稱(chēng)瓶中，厚度不超過(guò)5mm，精密稱(chēng)定。將瓶蓋取下，置稱(chēng)瓶旁，或?qū)⑵可w半開(kāi)，置烘箱內(nèi)于130℃干燥約2～3小時(shí)后，將稱(chēng)瓶蓋好，取出，置干燥器中放置40分鐘后，精密稱(chēng)定重量。再按上述方法自“將瓶蓋取下……”起，繼續(xù)干燥1～2小時(shí)，依法操作，至恒重為止。從減失重量和取樣量計(jì)算供試品的干燥失重(規(guī)定不得超過(guò)0.5％)。 計(jì)算：樣品取

50、樣量╱減失的重量╳100%,（三）減壓干燥法適用于熔點(diǎn)低，受熱不穩(wěn)定或水分難趕除的藥物。 除另有規(guī)定外，壓力應(yīng)在2.67kPa（20mmHg）以下。,（四）熱分析法 熱分析法是在程序控制溫度下，精確記錄待測(cè)物質(zhì)理化性質(zhì)與溫度的關(guān)系，研究其受熱過(guò)程所發(fā)生的晶型轉(zhuǎn)變、熔融、升華、吸附等物理變化和脫水、熱分解、氧化還原等化學(xué)變化，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行物理常數(shù)（如熔點(diǎn)和沸點(diǎn)）的確定、鑒別和純度檢查的方法。亦可用于藥物的穩(wěn)定性研究及

51、制劑輔料的優(yōu)選。,1. 熱重法（TGA）,熱重法（thermogravimetric analysis,TGA）：是在程序控制溫度下，測(cè)量物質(zhì)質(zhì)量與溫度關(guān)系的一種技術(shù),此法是用熱重天平（安裝在程序升溫爐中的微量天平，不受溫度影響）。 。 記錄質(zhì)量變化對(duì)溫度的關(guān)系曲線即熱重曲線。熱重曲線的縱坐標(biāo)為質(zhì)量(m)，橫坐標(biāo)為溫度(T)或時(shí)間(t)。最大稱(chēng)樣量200mg，精確量1μ g以下。取樣一般1~20mg，溫度T可達(dá)1000~1500℃

52、。N2流帶走揮發(fā)性物質(zhì)。,在溫度 T1：CaC2O4?H2O→ CaC2O4+H2O T2： CaC2O4 → CaCO3 +CO T3： CaCO3 →CaO+CO2 優(yōu)點(diǎn)：樣品量少，測(cè)定速度快，準(zhǔn)確度高，適用于貴重藥物或易氧化藥物的干燥失重測(cè)定；注意：本法不適用于測(cè)定揮發(fā)性雜質(zhì)較低的樣品；樣品要磨細(xì)與天平接觸好，控制惰性氣體的速度，升溫速度和記錄速度等事項(xiàng)

53、。,m,2. 差熱分析法（DTA）,差熱分析法（differential thermal analysis,DTA)是在程序控制溫度下，測(cè)量待測(cè)物質(zhì)和參比物之間的溫度差（△T）與溫度(或時(shí)間)之間的關(guān)系的一種技術(shù)。 差熱分析曲線記錄的縱坐標(biāo)為樣品與參比物的溫度差(?T)，?T與熱容量差(CR—Cs)成正比，橫坐標(biāo)為溫度。 本法可鑒別藥物或其多晶形、純度檢查以及熔點(diǎn)和水分等的測(cè)定。 放熱，溫差

54、Δ T >0；吸熱 ΔT < 0。 惰性參比物是：石英沙；α 型Al2O3。,△T,3. 差示掃描量熱法（differential scanning calorimetry,DSC),差示掃描量熱法是在程序控制溫度下，測(cè)量輸給待測(cè)物質(zhì)和參比物的能量差與溫度(或時(shí)間)關(guān)系的一種技術(shù)。,DSC維持樣品與參比物質(zhì)的溫度相同下所需要的能量差（當(dāng)樣品發(fā)生吸熱變化時(shí)，溫度下降，然后補(bǔ)充一定的能量使與參比物質(zhì)相同；當(dāng)樣品發(fā)生放熱反

55、應(yīng)，溫度升高，則減少能量供給，供給能量差相當(dāng)于樣品吸收或放出的 能量。,DSC與DTA不同點(diǎn)：DSC以熱流率為縱坐標(biāo)，T為橫坐標(biāo)；吸收峰向上，放熱峰向下； 相同點(diǎn)是：溫度軸的位置、形狀、數(shù)目與物質(zhì)的性質(zhì)有關(guān)，可用來(lái)定性、鑒別物質(zhì)，而峰的面積與反應(yīng)熱焓有關(guān)，可定量。 測(cè)溫度一致，加給樣品的能量： 樣品吸熱ΔE >0，峰向上； ΔE<0，峰向下。 熱分析法的應(yīng)用：研究藥物的理化性質(zhì)，如熔點(diǎn)、干燥失重等；測(cè)定熔

56、點(diǎn)，檢測(cè)對(duì)照品與標(biāo)準(zhǔn)品的純度；考察藥物的貯存穩(wěn)定性和制劑輔料的優(yōu)選。,十一、有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定法,在藥物的合成精制以及提取過(guò)程中，常用有機(jī)溶劑，不少對(duì)人體有害影響用藥安全。如苯、氯仿、二氧六環(huán)、二氯甲烷、吡啶、環(huán)氧乙烷。中國(guó)藥典采用氣相色譜法檢查殘留有機(jī)溶劑。測(cè)定法有： 1.溶液直接進(jìn)樣法:氣相色譜進(jìn)樣僅數(shù)微升，用內(nèi)標(biāo)法可以克 服由于進(jìn)樣量小而引起的誤差。（內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法） 2.頂空進(jìn)樣法:頂空進(jìn)樣法是氣相色譜特

57、有的一種進(jìn)樣方法.適 用于揮發(fā)性大的組分分析，進(jìn)樣為樣品的飽和蒸氣.,測(cè)定前色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)： 理論塔板數(shù)n； 分離度R； 重現(xiàn)性（RSD）； 拖尾因子T。n取決于固定相的種類(lèi)、性質(zhì)（粒度、粒度分布等）、填充情況、柱長(zhǎng)、流動(dòng)相的種類(lèi)和流速及測(cè)定柱效所用物質(zhì)的性質(zhì)。,三、特殊雜質(zhì)檢查方法,ChP中檢查項(xiàng)下包括：有效

58、性、安全性（毒性、熱原、無(wú)菌）、制劑通則（重量差異、崩解時(shí)限、溶出度、噴射試驗(yàn)等）。藥物中雜質(zhì)：無(wú)機(jī)雜質(zhì)（一般雜質(zhì)，生產(chǎn)和貯藏中易引入的，如氯離子、鐵離子、硫酸根、氫離子、氫氧根離子、重金屬、熾灼殘?jiān)龋?；有機(jī)雜質(zhì)（特殊雜質(zhì)，由于生產(chǎn)和貯存中根據(jù)性質(zhì)和工藝條件不同可能引入的） 。檢查方法：利用藥物和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上的差異； 利用藥物和雜質(zhì)在化學(xué)性質(zhì)上的差異。,(一) 臭味及揮發(fā)性的差異藥

59、物中如存在具有特殊氣味的雜質(zhì),可以由氣味判斷該雜質(zhì)的存在.例如：乙醇中的雜醇油；乙醚中的不揮發(fā)物。(二) 顏色的差異某些藥物自身無(wú)色,但從生產(chǎn)中引入了有色的有關(guān)物質(zhì),或其分解產(chǎn)物有顏色.例如：阿樸嗎啡易分解，分解產(chǎn)物在乙醚中呈紅色； 有機(jī)碘藥物，強(qiáng)熱時(shí)分解成紫紅色碘蒸氣，遇濕潤(rùn)的KI-淀粉試紙變藍(lán)色，如泛影酸、膽影酸、雙碘喹啉等。,一、利用藥物和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上的差異,(三) 溶解行為的差異有的藥物

60、可溶于水、有機(jī)溶劑或酸、堿中，而其雜質(zhì)不溶；或反之，雜質(zhì)可溶而藥物不溶.例如：葡萄糖中糊精的檢查；ASA溶于Na2CO3溶液，而SA的醋酸苯酯、水楊酸苯酯則不溶，可用來(lái)檢查ASA中SA等特殊雜質(zhì)。(四) 旋光性質(zhì)的差異具有旋光性的物質(zhì)稱(chēng)為光學(xué)活性物質(zhì).比旋度(或旋光度)的數(shù)值可以用來(lái)反映藥物的純度,限定雜質(zhì)的含量.例如：硫酸阿托品為消旋體，而莨菪堿為左旋體，檢查特殊雜質(zhì)。,(五) 對(duì)光吸收性質(zhì)的差異1. 紫外分光光度法2.

61、原子吸收分光光度法3. 紅外分光光度法4. 熒光分析法(六) 吸附或分配性質(zhì)的差異1. 薄層色譜法2. 紙色譜法3. 高效液相色譜法4. 氣相色譜法,A、薄層層析對(duì)照法（TLC法）以硅膠、Al2O3均勻鋪在玻璃板上制成TLC板，板在105℃ 活化后點(diǎn)樣，用微量注射進(jìn)樣器分幾次點(diǎn)樣。A、雜質(zhì)對(duì)照法：例：檢查枸櫞酸乙胺嗪中的N-甲基哌嗪配制：樣品50mg/ml 甲醇液；雜質(zhì)對(duì)照液50μ g/ml甲醇液；點(diǎn)樣：各5

62、0μ l展開(kāi)劑：氯仿：甲醇：氨水（13：5：1）顯色劑：碘蒸氣中合格條件：供試品斑點(diǎn)所顯色不得比對(duì)照液所顯斑點(diǎn)色深。L=0.1%,B、高低濃度對(duì)比法：適用于無(wú)雜質(zhì)對(duì)照品或無(wú)法確定待檢雜質(zhì)用此法；方法：將供試品溶液按限量要求稀釋至一定濃度作為對(duì)照液，與供試品個(gè)別點(diǎn)在同一薄層板上，供試品所顯的雜質(zhì)斑點(diǎn)不得深于對(duì)照溶液所顯顏色。例：氫化可的松中其它甾體的檢查供試液30mg/ml；對(duì)照液：供試液稀釋50倍，60μg/ml薄層：5

63、× 20cm玻璃板；硅膠G展開(kāi)劑：氯仿：乙醚：甲醇：水（385：60：30：2）顯色劑：堿性四氮唑點(diǎn)樣：5×μl規(guī)定：供試品中雜質(zhì)點(diǎn)不超過(guò)3個(gè) 供試品中雜質(zhì)點(diǎn)的顏色不超過(guò)對(duì)照液斑點(diǎn)的顏色。,二、利用藥物和雜質(zhì)在化學(xué)性質(zhì)上的差異,(一) 酸堿性的差異1. 規(guī)定消耗滴定液的體積2. pH值法3. 指示劑法(二) 氧化還原性的差異利用藥物與雜質(zhì)之間的氧化還原電位的差異進(jìn)行檢查(三)

64、 雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生沉淀利用藥物中存在的雜質(zhì)能與一定試劑發(fā)生沉淀反應(yīng)而檢查的方法,(四) 雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色是根據(jù)限量要求,規(guī)定:一定反應(yīng)條件下不得產(chǎn)生某種顏色;或供試品在相同條件下呈現(xiàn)的顏色不得超過(guò)雜質(zhì)對(duì)照品的顏色;或供試品在一定的條件下的吸收度不得過(guò)一定值.(五) 雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生氣體利用與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生氣體,來(lái)檢查的雜質(zhì)有砷、硫、碳酸鹽、氨或胺鹽、氰化物等.(六) 藥物經(jīng)有機(jī)破壞后檢查雜質(zhì)1. 砷檢