第二章藥物的雜質(zhì)檢查

1、五、重金屬檢查法 (1)重金屬概念 工業(yè)上，比重5以上的金屬 藥典上重金屬指在實驗條件下能夠與硫代乙酰胺或Na2S反應(yīng)生成沉淀的金屬雜質(zhì)。如Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Bi、Zn、Co、Ni等，其中鉛Pb最常遇到，且易積蓄中毒，因此，檢查時以Pb為代表。,,（2）中國藥典（2000年版）共收載四法。 1. 硫代乙酰胺法 2. 熾灼殘渣法 3. 硫化鈉法 4. 微

2、孔濾膜法,（一）硫代乙酰胺法1. 原理對照法 硫代乙酰胺在弱酸性條件下（pH3.5醋酸鹽緩沖液）水解產(chǎn)生硫化氫，與微量重金屬離子生成黃色至棕黑色的硫化物均勻混懸液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液同法處理后所呈顏色比較。白色背景，自上而下。 適用于在實驗條件下供試液澄清、無色，對檢查無干擾或經(jīng)處理后對檢查無干擾的藥物。,,2.方法 （1）在弱酸性下（pH3.5醋酸鹽緩沖液），以硫代乙酰胺為顯色劑。 （2）在堿性下（若藥

3、物在酸性下不溶解），以Na2S為顯色劑（第三法）。 3.討論 （1）硫代乙酰胺試劑：在弱酸性下轉(zhuǎn)換為H2S，所以與H2S顯色劑具有相同作用和效果，無惡臭、濃度易控制。,（2）用硝酸鉛配制標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液（加硝酸防止Pb2+水解），臨用前稀釋而成，標(biāo)準(zhǔn)硝酸鉛溶液10?g Pb2+/ml，最適檢出濃度：27ml溶液中含10?g~20?g的Pb2+ 。 （3）酸度：金屬離子與H2S呈色酸度影響較大。pH3-3.5硫化鉛沉淀較完全，酸度增

4、大呈色變淺，太大其至不呈色。,（4）消除顏色干擾： A.外消色法：樣品溶液有色時：向標(biāo)準(zhǔn)管中滴加稀焦糖溶液（蔗糖用火加熱，掌握好加熱程度），使與樣品管顏色一致，或向標(biāo)準(zhǔn)管中加pH指示劑使其顏色一致。 B.內(nèi)消色法 C.改用微孔濾膜過濾法。,（5）干擾物的排除：①微量Fe的干擾: Fe3++S2- S 排除方法加入維生素C或鹽酸羥胺Fe3++Vc Fe2++去氫抗壞

5、血酸,,②大量的Fe3＋（如枸櫞酸鐵胺）：加入濃HCI Fe3++HCI—HFeCl62-（六氯合鐵離子）黃色，用乙醚提取到無色，剩余少量Fe3+ ，在氨堿性溶液中，加掩蔽劑 KCN K3[Fe(CN)6]，(Na2S為顯色劑）（第三法）。③藥物本身能夠與顯色劑生成不溶性硫化物，如硫酸鋅ZnS04+Na2S ZnS ，加掩蔽劑KCN：Zn2++2KCN Zn(CN)2 2CN- [Zn

6、(CN)4]2-被掩蔽起來，依第三法檢查。,,,,,,,（6）重金屬限量低時，用比色管難以觀察，可改用微孔濾膜過濾法（第四法，本法適用于2-5μg重金屬） 。,（二）熾灼殘渣法 適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及不溶于水、稀酸、乙醇及堿或能與重金屬離子形成配位化合物的有機藥物。原理 對照法 500～600℃熾灼后的殘渣，經(jīng)處理后，按第一法檢查。,2. 操作方法,含鈉及氟的有機藥物應(yīng)用鉑坩堝、石英坩堝或硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿（因可腐蝕

7、瓷坩堝，帶入大量重金屬）。,（三）硫化鈉法 適用于溶于堿而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物。如磺胺類、巴比妥類。 1. 原理 在堿性介質(zhì)中以硫化鈉為顯色劑，使Pb2+生成PbS微粒的混懸液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所顯顏色比較，不得更深。,2. 測定條件 （1）NaOH堿性條件下（2）顯色劑：硫化鈉試液，現(xiàn)用現(xiàn)配,（四）微孔濾膜法 適用于含2～5?g重金屬雜質(zhì)及有色供試液的檢查。

8、 方法：首先依第一法檢查，結(jié)果經(jīng)微孔濾膜過濾后比較色斑。,總之，各國檢查重金屬方法不一。USP（24）檢查重金屬時，使用硫代乙酰胺顯色。檢查時，除用供試管、對照管，還規(guī)定用監(jiān)控管，三管同法檢查。BP（2000）用供試管、對照管和空白管檢查。,97：78．重金屬檢查中，加入硫代乙酰胺時溶液控制最佳的pH值是（B）A. 1.5 B. 3.5 C．7.5D. 9.5 E. 11.5,95：84．微孔濾膜法是

9、用來檢查（C）A. 氯化物 B. 砷鹽C. 重金屬 D. 硫化物E. 氰化物,例1. 中國藥典(2000年版)重金屬檢查法中，所使用的顯色劑是（BC） A. 硫化氫試液 B. 硫代乙酰胺試液 C. 硫化鈉試液 D. 氰化鉀試液 E. 硫氰酸銨試液,例2. 葡萄糖中進行重金屬檢查時，適宜的條件是（C）A. 用硫代乙酰胺為標(biāo)準(zhǔn)對照液B. 用10ml稀硝酸/50m

10、l酸化C. 在pH3.5醋酸鹽緩沖溶液中D. 用硫化鈉為試液E. 結(jié)果需在黑色背景下觀察,例3. 現(xiàn)有一藥物為苯巴比妥，欲進行重金屬檢查，應(yīng)采用《中國藥典》上收載的重金屬檢查的哪種方法（C） A. 一法 B. 二法 C. 三法 D. 四法 E. 以上都不對,例4. 下面哪些方法為《中國藥典》收載的重金屬檢查方法（ACD） A. 500～600℃熾灼殘渣后,按一法操作 B. pH3～3.5條件下

11、，加入硫化氫試液 C. 堿性下，加入硫化鈉試液 D. 按一法操作，結(jié)果用微孔濾膜過濾后觀察色斑 E. 以上都對,六、砷鹽檢查法,（一）古蔡氏法（Gutzeit） （ChP（2000）, BP（1998）, JP采用）,1. 原理 利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中的微量砷鹽反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液在同樣條件下生成的砷斑比較，判定藥物

12、中砷鹽的限量． 優(yōu)點：靈敏度高，1μgAs即可檢出。 缺點：Sb干憂。,2. 操作方法（1）標(biāo)準(zhǔn)砷斑用2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液制備（2）供試品如需經(jīng)有機破壞，則標(biāo)準(zhǔn)砷溶液應(yīng)平行操作 操作：樣品和標(biāo)準(zhǔn)品(As203)分別置檢砷瓶中 KI,SnC12 As3+ +Zn 粉/HCl AsH3 PbAc2棉花 HgBr2試紙 砷斑,,,,,,,,3.討論： (1)試劑的

13、作用： ①KI還原劑As5+-As3+，五價砷在酸性溶液也能被金屬Zn還原為砷化氫，但生成砷化氫速度較慢，故加KI還原As5+為三價砷。 ②SnC12:還原劑As5+-As3+;除去KI被氧化生成的I2，生成的I-與鋅離子形成穩(wěn)定配位離子，有利于生成砷化氫反應(yīng)，4I-+Zn2+-ZnI42-；生成Zn-Sn齊，去極化作用，使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生 。(H2在Zn表面超電壓0.70V.在Sn表面超電壓0.50V ),③PbAc2

14、棉花：樣品中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中生成色斑。醋酸鉛棉花用量60mg（裝管高度60-80mm），應(yīng)松緊適度。 ④ HgBr2試紙：與砷化氫作用較氯化汞試紙靈敏，但其砷斑不穩(wěn)定，反應(yīng)中應(yīng)保持干燥及避光，且立即與標(biāo)準(zhǔn)品比較。,⑤ SnC12和KI可抑制微量Sb的干擾，在實驗條件下，100?g Sb存在不干擾測定。（2）最佳實驗條件：①試劑的濃度②反應(yīng)溫度：25-40。C水浴反應(yīng)45min③Zn粒：2g（ Zn粒大小，

15、加減），2000±70μm(1號篩）④臨用新配標(biāo)準(zhǔn)液（lμgAs/ml）：取AS203 0.132g 1000m1，取出l0ml--> 1000ml，即得。,,（3）干擾物的排除： ①硫化物的排除：S2-、S032-、S2032- H+ H2S、SO2 與溴化汞試紙作用生成HgS色斑或Hg。排除方法先加濃HNO3。 ②Fe3+:供試品為鐵鹽，可消耗還原劑，影響測定條件，并能氧化砷化氫，干擾測定：排除方法可

16、先加酸性氯化亞錫SnC12，使Fe3+ Fe2+除去干擾，如枸櫞酸鐵銨中砷鹽的檢查。,,,,,③共價鍵結(jié)合的砷化物：先要有機破壞，破壞方法有堿破壞法或酸破壞法，ChP常采用前者。④銻的干擾： 銻斑（灰色），需改用白田道夫法。,,（二）Ag-DDC法 二乙基二硫代氨基甲酸銀 對照法檢查、含量測定 （ChP90,95,2000采用，85未用）， （Silyerdithyldithi

17、o-Carbamate Ag-DDC）,USP（24）,利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中的微量砷鹽反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷化氫，砷化氫與Ag-DDC溶液作用，還原Ag—DDC為紅色膠態(tài)銀，直接比色或于510nm波長處測定吸收度，與標(biāo)準(zhǔn)進行比較。,過程：第一步同古蔡氏法生成AsH3 第二步將生成的AsH3經(jīng)導(dǎo)管導(dǎo)入盛有Ag-DDC吡淀溶液中，與之作用使Ag-DDC中銀還原為紅色膠態(tài)銀溶液，同法處理標(biāo)準(zhǔn)砷溶液后比較（目

18、視或于510nm處測定吸收度）。,優(yōu)點：①靈敏度高 0.5μg As/30ml;②重現(xiàn)性好，儀器測定；③消除銻干擾 吸收度： 35μgSbH3≈1μgAsH3 缺點：吡啶惡臭，ChP90,95,2000用三乙胺：氯仿(1.8:98.2）溶液代替吡啶，其靈敏度略低于吡啶溶液。,用有機堿吸收反應(yīng)產(chǎn)生的HDDC,有利于反應(yīng)的進行。 本法適用于含Sb量小于500?g的供試品。,,（三）白田道夫法 （Bttendor

19、ff ) ChP（2000） 原理 對照法 氯化亞錫在HCI中能將砷鹽還原成棕褐色的膠態(tài)砷，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液、同法處理后比較。 優(yōu)點：不受銻干擾 缺點：靈敏度低 20μgAs203/10ml（15μg As/l0ml），若加入少量HgC12,靈敏度提高 2μgAs203/10ml。,,,（四）奇列氏法（次磷酸法，BP收載（1998）） 原理：在鹽酸溶液中，用次磷酸還

20、原砷鹽為棕色的游離砷，再與一定量的標(biāo)準(zhǔn)砷溶液同法處理所顯顏色比較 NaH2P02+HCI--H3P02+NaCl 3H3P02+2H3As03--3H3P03+2As +3H20 生成的游離砷，用乙醚提取，在水·醚間形成棕色環(huán)。 優(yōu)點：不受S2-，SO32-，Sb，Hg，Ag干擾。缺點：靈敏度低，10μgAs203/10ml,,98：82. 在藥物的雜質(zhì)檢查中，其限量一般不超過百萬分之十的是（D）A

21、. 氯化物 B. 硫酸鹽C. 醋酸鹽 D. 砷鹽 E. 淀粉,97：79. 在用古蔡法檢查砷鹽時，導(dǎo)氣管中塞入醋酸鉛棉花的目的是（C）A. 除去I2 B. 除去AsH3C. 除去H2S D. 除去HBrE. 除去SbH3,99x：75．砷鹽檢查法中，在檢砷裝置導(dǎo)氣管中塞入醋酸鉛棉花的作用是（C）A. 吸收砷化氫 B. 吸收溴化氫C. 吸收硫化氫 D. 吸收氯化氫E. 吸收銻化氫,

22、95：140. 古蔡氏法中，SnC12的作用有（ACD）A. 使As5+→As3+ B. 除去H2SC. 除去I2 D. 組成鋅錫齊E. 除去其它雜質(zhì),95：83. Ag—DDC法檢查砷鹽的原理為：砷化氫與Ag—DDC吡啶作用，生成的物質(zhì)是（E）A. 砷斑B. 銻斑 C. 膠態(tài)砷D. 三氧化二砷 E. 膠態(tài)銀,98：137. 中國藥典（1995年版）收載的古蔡法檢查砷鹽的基本原理是（BE）

23、 A. 與鋅、酸作用生成H2S氣體 B. 與鋅、酸作用生成AsH3氣體 C. 產(chǎn)生的氣體遇氯化汞試紙產(chǎn)生砷斑 D. 比較供試品砷斑與標(biāo)準(zhǔn)品砷斑的面積大小 E. 比較供試品砷斑與標(biāo)準(zhǔn)品砷斑的顏色強度,96：[106—110]（99x：[126—130]）適用于 A. 古蔡氏（Gutzeit）法 B. 二乙基二硫代氨基甲酸銀法 C. A和B均可 D.

24、A和B均不可 96：106．在連接砷化氫發(fā)生瓶的導(dǎo)管中裝入醋酸鉛棉花（C） 96：107．使用的標(biāo)準(zhǔn)砷溶液為2m1（C） 96：108．測定結(jié)果要與標(biāo)準(zhǔn)砷斑相比較（A） 96：109．要測定吸收度（B） 96：110．要用酸堿滴定法（D）,例[1～5]用古蔡氏法檢查下列藥物中的砷鹽時，排除干擾的方法： A. 先用硝酸或溴水氧化 B. 先加酸性氯化亞銻還原 C. 改用白田道夫法

25、 D. 先加氰化鉀掩蔽 E. 先加草酸生成沉淀 1. 硫化物（A） 2. 亞硫酸鹽（A） 3. 硫代硫酸鹽（A） 4. 高鐵鹽（B） 5. 銻鹽（C）,例6. Ag—DDC法檢查砷鹽時，所產(chǎn)生的紅色溶液為（C） A. HDDC吡啶溶液 B. Ag吡啶溶液 C. Ag的膠態(tài)溶液 D. Ag(DDC)溶液 E. AsAg3溶液,例7. ChP（2000）

26、檢查葡萄糖酸銻鈉中的砷鹽時，應(yīng)選用（B）A. 古蔡氏法B. 白田道夫法C. 碘量法D. Ag—DDC法E. 契列法,例8. 葡萄糖中砷鹽的檢查，需要的試劑應(yīng)有（BCDE） A．Pb2+標(biāo)準(zhǔn)液 B．SnCl2試液 C．KI試液 D．Zn E．醋酸鉛棉花,例9. Ag-DDC法檢查砷鹽時，加入碘化鉀和酸性氯化亞錫的作用為（ABCDE）A．將As5+還原為As3+B．有

27、利于AsH3生成反應(yīng)C．抑制SbH3的生成D．形成Zn-Sn齊以均勻而連續(xù)地發(fā)生氫氣E．催化加速生成AsH3,例10. 古蔡氏法檢砷，藥典規(guī)定制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑時，應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（C）A. 1mlB. 5mlC. 2mlD. 依限量大小決定E. 以上都不對,例11. 古蔡氏法檢查所用的溶液是(B)A. 強堿性溶液B. 強酸性溶液C. 含稀鹽酸10ml/50ml溶液D. 含稀硝酸10ml/50ml溶液E. 含強氧化劑(

28、硝酸或過硫酸銨)溶液,96：[96—100]所含待測雜質(zhì)的適宜檢測量為A. 0.002mg B. 0.01～0.02mgC. 0.01～0.05mg D. 0.05～0.08mgE. 0.1～0.5mg 96：96. 硫酸鹽檢查法中，50ml溶液中(E)96：97. 鐵鹽檢查法中，50ml溶液中(C)96：98. 重金屬檢查法中，35ml溶液中(B)96：99. 古蔡氏法中，反應(yīng)液中(

29、A)96：100. 氯化物檢查法中，50ml溶液中(D),97：[106—110]A. 硝酸銀試液 B. 氯化鋇試液C. 硫代乙酰胺試液 D. 硫化鈉試液E. 硫氰酸鹽試液97：106．藥物中鐵鹽檢查（E）97：107．磺胺嘧啶中重金屬檢查（D）97：108．藥物中硫酸鹽檢查（B）97：109．葡萄糖中重金屬檢查（C）97：110．藥物中氯化物檢查（A）,98：[96—100]可用于檢查

30、的雜質(zhì)為A. 氯化物 B. 砷鹽 C. 鐵鹽D. 硫酸鹽 E. 重金屬98：96．在酸性溶液中與氯化鋇生成渾濁液的方法（D）98：97．在酸性溶液中與硫氰酸鹽生成紅色的方法（C）98：98．在實驗條件下與硫代乙酰胺形成均勻混懸溶液的方法（E）98：99．Ag-DDC法（B）98：100．古蔡法（B）,例[1～5] 雜質(zhì)檢查中所用的酸是A. 稀硝酸 B. 稀鹽酸