亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因重組腺病毒的構(gòu)建、表達(dá)及免疫原性研究.pdf

1、本研究的目的是構(gòu)建亞洲Ⅰ型(AsiaⅠ)口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus，F(xiàn)MDV)VP1基因的重組犬Ⅱ型腺病毒，并對其表達(dá)蛋白的免疫原性進(jìn)行檢測，為重組活載體疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。 根椐測序結(jié)果，設(shè)計(jì)一對引物，利用PCR技術(shù)，從含有YN株亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒P1基因的pTeasy質(zhì)粒中擴(kuò)增出VP1基因，繼而構(gòu)建出真核表達(dá)載體PVAX-VP1。再將含有巨細(xì)胞啟動(dòng)子CMV的目的基因表達(dá)盒連接到穿梭載體p

2、VAX△E3上，篩選出VP1表達(dá)盒方向與E3區(qū)轉(zhuǎn)錄方向一致的重組子，獲得轉(zhuǎn)移載體。再經(jīng)酶切、連接等方法獲得重組腺病毒質(zhì)粒。利用脂質(zhì)體介導(dǎo)將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DK細(xì)胞，轉(zhuǎn)染三次后，細(xì)胞出現(xiàn)明顯的腺病毒病變。經(jīng)PCR擴(kuò)增、測序檢測及基因組酶切鑒定，證明該病毒即為重組犬Ⅱ型腺病毒。命名為CAV2/FMDV。經(jīng)驗(yàn)證，該重組毒可穩(wěn)定遺傳，其毒價(jià)為103.5TCID50/ml。經(jīng)Western-blotting檢驗(yàn)，證明該表達(dá)產(chǎn)物具有抗原活性。本實(shí)驗(yàn)成功