運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌發(fā)酵條件優(yōu)化及其PDC基因的原核表達(dá).pdf

1、隨著化石能源的逐漸枯竭，燃料乙醇作為可替代能源的研究和發(fā)展在世界范圍內(nèi)受到越來越多的重視。構(gòu)建能夠高效發(fā)酵糖類生產(chǎn)乙醇的工程菌株是當(dāng)前燃料乙醇生產(chǎn)研究的一項(xiàng)重要內(nèi)容。
　　本研究首先對(duì)運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌乙醇發(fā)酵條件和培養(yǎng)基成分分別進(jìn)行單因子優(yōu)化和正交優(yōu)化；其后采用該菌基因組為模板，克隆乙醇發(fā)酵關(guān)鍵酶基因pdc，以誘導(dǎo)型表達(dá)質(zhì)粒pET-28a為載體，構(gòu)建重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，初步優(yōu)化誘導(dǎo)表達(dá)條件，最后，應(yīng)用重組大腸桿菌進(jìn)行乙醇

2、發(fā)酵試驗(yàn)，研究該基因的表達(dá)對(duì)宿主菌體的葡萄糖代謝途徑及乙醇發(fā)酵能力的影響。
　　經(jīng)過優(yōu)化后確定運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌Z-1培養(yǎng)基最佳葡萄糖含量為10％~15%，最適接種量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的1/50，最佳發(fā)酵溫度為30℃~35℃，培養(yǎng)基最適pH為8.0~9.0；其發(fā)酵培養(yǎng)基最佳基礎(chǔ)成分為：MgSO4：0.01%，(NH4)2SO4：0.18%，KH2PO4：0.18%，Yeastextract：0.9%；在這四種成分中，Yeastextra