維生素C發(fā)酵新菌系166--2051的篩選及其發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、“二步發(fā)酵法”是當(dāng)前維生素C生產(chǎn)的主要工藝技術(shù)，屬我國(guó)獨(dú)創(chuàng)。該法的第二步發(fā)酵為兩種菌的混合發(fā)酵?；炀l(fā)酵的復(fù)雜性對(duì)提高轉(zhuǎn)化率有不利的影響。所以，對(duì)第二步混合發(fā)酵菌系進(jìn)行誘變篩選和發(fā)酵條件優(yōu)化，是提高二步發(fā)酵轉(zhuǎn)化效率的一條有效途徑。
　　本文以東北制藥集團(tuán)股份有限公司的生產(chǎn)菌系25b-0為研究對(duì)象，通過(guò)“神州七號(hào)”太空飛船搭載，選育獲得高效的突變新菌系166-2051，并采用響應(yīng)面法對(duì)新菌系的發(fā)酵培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化。經(jīng)過(guò)“神州七號(hào)”

2、飛船搭載，分別獲得1020株和3030株伴生菌和產(chǎn)酸菌的誘變株，再經(jīng)多輪篩選，最終得到一新組合誘變菌系166-2051。通過(guò)新菌系的制種特征的研究，確定了最佳種液條件，即裝量20 mL/250mL、29℃、180rpm振蕩培養(yǎng)15-18 h。利用響應(yīng)面法對(duì)新誘變菌系的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)顯著影響產(chǎn)2-酮基-L-古龍酸的成分分別為玉米漿、尿素和KH2PO4，優(yōu)化后的最佳培養(yǎng)基配比為:山梨糖9％、玉米漿1.95％、尿素1.0％、KH2

3、PO40.03％、MgSO40.01％、CaCO30.05％、初始pH6.7-7.0。在優(yōu)化后的發(fā)酵條件下，新菌系延遲期縮短，發(fā)酵35h2-酮基-L-古龍酸含量比原培養(yǎng)基提高5％，終點(diǎn)2-酮基-L-古龍酸含量提高7.67％;通過(guò)比較搖瓶培養(yǎng)中菌體的生長(zhǎng)曲線和發(fā)酵產(chǎn)酸曲線，證實(shí)了第二步發(fā)酵產(chǎn)2-酮基-L-古龍酸與菌體生長(zhǎng)是相偶聯(lián)的;對(duì)發(fā)酵過(guò)程中快速產(chǎn)2-酮基-L-古龍酸階段的伴生菌OD值、小菌OD值和2-酮基-L-古龍酸濃度進(jìn)行相關(guān)分析，