L-組氨酸產(chǎn)生菌的選育及其發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、本文以谷氨酸棒桿菌AJ88為出發(fā)菌株，對(duì)L-組氨酸的發(fā)酵法生產(chǎn)進(jìn)行了研究。主要內(nèi)容及結(jié)果如下： 1.以組氨酸的茚三酮顯色和Pauly特征顯色為根據(jù)，結(jié)合紙層析法，確定利用Pauly顯色和茚三酮顯色相結(jié)合對(duì)發(fā)酵液中的L-組氨酸進(jìn)行定性分析，采用點(diǎn)樣紙層析茚三酮顯色后洗脫再比色來(lái)定量測(cè)定發(fā)酵液中的L-組氨酸，茚三酮顯色洗脫液最佳吸收波長(zhǎng)為510nm，最佳洗脫時(shí)間為30min，當(dāng)點(diǎn)樣組氨酸含量在2μg～12μg范圍內(nèi)時(shí)呈現(xiàn)較好的線(xiàn)性。

2、 2.對(duì)出發(fā)菌用DES和NTG逐級(jí)誘變處理，采用8-氮鳥(niǎo)嘌呤(8-AG)，2,6-二氯嘌呤(DCP)，硫唑嘌呤(SP)，2-硫尿嘧啶(2-TU)，氨基三氮唑(AMT)以及1,2,4-三唑丙氨酸(TRA)作為抗性藥物進(jìn)行選育，并使菌株帶上組氨酸酶缺陷型標(biāo)記，最終獲得一株能夠較多積累L-組氨酸的菌株HZ5013(TRAR，AMTR，histidase，DCPR，2-TUR)。在以葡萄糖為碳源、硫酸銨為氮源的培養(yǎng)基中發(fā)酵3d，產(chǎn)酸可達(dá)

3、4.63g/L，比出發(fā)菌株產(chǎn)酸提高了近2倍。 3.對(duì)菌株HZ5013進(jìn)行了培養(yǎng)基和發(fā)酵條件的優(yōu)化。得到最佳的種子培養(yǎng)基為(g/L)：葡萄糖25，(NH4)2SO410，玉米漿25，KH2PO41.5，MgSO4·7H2O1，CaCO320，VH10μg/L；最佳發(fā)酵培養(yǎng)基為(g/L)：葡萄糖80，(NH4)2SO431，玉米漿5，KH2PO41.3，MgSO4·7H2O0.5，CaCO320，VH5μg/L；搖瓶發(fā)酵最佳培養(yǎng)條件

4、為：培養(yǎng)基初始pH7.0，接種量8％，裝液量為15mL/250mL搖瓶或20mL/500mL搖瓶，往復(fù)式搖床30±1℃培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速100次/min，發(fā)酵周期72h。優(yōu)化后最終產(chǎn)酸可達(dá)5.5g/L。 4.考察了添加氨基酸、有機(jī)酸、維生素、各種營(yíng)養(yǎng)源等以及改變培養(yǎng)手段對(duì)L-組氨酸代謝的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)添加0.1g/LL-亮氨酸、L-異亮氨酸和L-脯氨酸時(shí)，產(chǎn)酸有所提高。添加其它氨基酸均使產(chǎn)酸有所下降。添加丙酮酸、草酸、乙酸能使產(chǎn)酸明