木糖利用重組運動發(fā)酵單胞菌菌株的構(gòu)建及其發(fā)酵性能的初步評價.pdf

1、充分利用木質(zhì)纖維素水解液中的所有組分,是以木質(zhì)纖維素為原料發(fā)酵燃料乙醇的一個關鍵因素.木糖是木質(zhì)纖維素中最重要的五碳糖組分,也是自然界僅次于葡萄糖的第二大糖源,因此人們在開發(fā)能同時發(fā)酵葡萄糖和木糖生成乙醇的微生物菌種上做了很多工作.運動發(fā)酵單胞菌能高效發(fā)酵葡萄糖生產(chǎn)乙醇,但不能利用木糖.本工作的目的就是構(gòu)建能發(fā)酵木糖產(chǎn)乙醇的重組運動發(fā)酵單胞菌菌株. 首先通過PCR擴增得到Peno-talB和tktA基因片段,通過與載體pUC19

2、的連接得到質(zhì)粒pUC19-Peno-talB/tktA,其中talB和tktA共用一個eno啟動子.將Peno-talB/tktA連接到已帶有Pgap-xylA-xylB的穿梭載體pZB21上,得到含有四個與木糖代謝有關基因的質(zhì)粒pZB21-Pgap-xylA/xylB-Peno-ta/B/tktA.通過電穿孔轉(zhuǎn)化此質(zhì)粒到z mobilis CP4中,對檢出的轉(zhuǎn)化子Z mobilis CP4(pZB21-Peno-talB/tktA-P

3、gap-xylA/xylB)進行的酶活測定表明四個基因均可表達,其中重組菌1<'＃>的酶活水平分別為:XI酶活為0.499U/10min/mg蛋白；XK酶活為0.377U/min/mg蛋白；TAL酶活為0.047U/min/mg蛋白；TKT酶活為0.291U/min/mg蛋白. 通過木糖生長試驗確定重組菌不能以木糖為唯一碳源生長.另外,在重組菌的木糖液體生長試驗中還發(fā)現(xiàn)少量乙醇的生成. 進一步進行的木糖發(fā)酵性能初步評價試