利用原生質(zhì)體融合技術構(gòu)建纖維燃料乙醇全糖發(fā)酵高產(chǎn)菌株.pdf

1、本文從南陽酒精酵母1308(Saccharomyces cerevisiae)的二倍體出發(fā)，利用隨機孢子分析得到了單倍體并進行了發(fā)酵性能試驗，篩選到了一株發(fā)酵性能較好的單倍體D-12。 對親本菌株D-12和嗜鞣管囊酵母(Pachusolen tannophilus)P-01的原生質(zhì)體形成和再生條件進行了試驗，其最佳條件分別為：培養(yǎng)9h的菌體，采用0.1％β-巰基乙醇預處理30min，4mg/mL的蝸牛酶和4mg/mL的纖維素酶的

2、混和酶液酶解1.5h，原生質(zhì)體的形成率和再生率分別為93.6％和15.9％；培養(yǎng)21h的菌體，采用0.1％β-巰基乙醇預處理30min，4mg/mL的蝸牛酶和4mg/mL的纖維素酶的混和酶液酶解1.5h，原生質(zhì)體的形成率和再生率分別為97.7％和9.9％。 采用高溫滅活的方法對親株D-12的原生質(zhì)體進行徹底滅活，條件為：70℃水浴處理35min。采用紫外滅活的方法對親株P-01的原生質(zhì)體進行徹底滅活，條件為：15w紫外燈下距離3

3、0cm垂直照射60s。 用PEG作促融劑誘導滅活的雙親原生質(zhì)體進行融合，經(jīng)TTC平板初篩、發(fā)酵復篩和同工酶鑒定，獲得一株能夠進行全糖發(fā)酵(總糖濃度為6％)的性能優(yōu)良的融合子F10。其酒精度達到1.3ml/100ml(v/v)，比親株P-01(0.95ml/100ml)提高了36.8％。 最后，我們研究了融合子F10在玉米秸稈水解液中的發(fā)酵性能。F10發(fā)酵玉米秸稈水解液結(jié)束時酒精度達到1.1ml/100ml(v/v)，遠遠