高溫酵母的分離鑒定及原生質(zhì)體融合構(gòu)建耐高溫高產(chǎn)酒精酵母.pdf

1、從來(lái)源不同的基質(zhì)中共分離得到227株耐高溫酵母菌,經(jīng)初篩、復(fù)篩和酒精發(fā)酵試驗(yàn),獲得一株耐高溫且具有一定產(chǎn)酒精能力的酵母菌株h-1,其在42℃下72小時(shí)發(fā)酵,酒精產(chǎn)率為5.5％.研究了h-1的形態(tài)和生理生化特性,結(jié)果表明:h-1菌株產(chǎn)生1-4個(gè)土星行子囊孢子,該菌株發(fā)酵葡萄糖、蔗糖,弱發(fā)酵棉籽糖,不發(fā)酵麥芽糖、半乳糖,乳糖;同化棉籽糖、纖維二糖、木糖、檸檬酸、琥珀酸、蔗糖,不同化肌醇、核糖、赤蘚糖醇、鼠李糖、核糖醇、甘露醇、可溶性淀粉、阿

2、拉伯糖、海藻糖、半乳糖、麥芽糖、乳糖;不能同化硝酸鹽;可在無(wú)維生素培養(yǎng)基上生長(zhǎng);37℃下可生長(zhǎng).根據(jù)《The Yeast》(第三版),鑒定h-1菌株屬于的土星漢遜酵母(Hansenula Saturnus).選擇化學(xué)藥物和紫外滅活單親原生質(zhì)體為遺傳標(biāo)記,測(cè)定了放線菌酮、三唑酮、多菌靈、灰酶特殺、決菌、霜霉狂殺對(duì)h-1和釀酒酵母SP-48的抑制作用,結(jié)果表明只有0.01%的三唑酮可以抑制SP-48,而不抑制h-1,選擇0.01%的三唑酮作

3、為藥物標(biāo)記.測(cè)定了紫外照射劑量和h-1原生質(zhì)體致死率的關(guān)系,當(dāng)紫外燈為20瓦,照射距離為30cm,照射時(shí)間為2分鐘時(shí),h-1原生質(zhì)體的致死率為100%.因此,以0.01%的三唑酮和紫外照射h-1原生質(zhì)體2分鐘為遺傳標(biāo)記.采用PEG法將h-1酵母與不耐高溫的高產(chǎn)酒精酵母SP-48進(jìn)行原生質(zhì)體融合,獲得既耐高溫酒精產(chǎn)率又較高的融合子LZ-3,LZ-3 72小時(shí)發(fā)酵,酒精產(chǎn)率為7.5%.融合子LZ-3遺傳性狀穩(wěn)定,傳代20次后,融合子LZ-3

4、的酒精產(chǎn)率和初代相比沒(méi)有明顯變化.確定了融合子LZ-3生長(zhǎng)和發(fā)酵的最適溫度和pH值;研究了溫度、pH值和接種量對(duì)生長(zhǎng)和發(fā)酵曲線的影響;測(cè)定了融合子LZ-3的耐酸堿;耐酒精;耐鹽;耐糖和耐發(fā)酵副產(chǎn)物特性.結(jié)果表明:融合子LZ-3的最適生長(zhǎng)溫度為36℃,最適生長(zhǎng)pH為5;最適發(fā)酵溫度為34℃,最適發(fā)酵pH為5;溫度和接種量對(duì)生長(zhǎng)和發(fā)酵曲線的影響顯著,pH對(duì)生長(zhǎng)和發(fā)酵曲線的影響不顯著;耐酒精能力為20%(v/v);耐鹽能力為11%;可在50%