鞘糖脂Gb3的配體結(jié)構(gòu)對(duì)其胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)挠绊?pdf

1、志賀(氏)菌毒素(Shiga toxin)是主要由痢疾志賀菌(Shigella dysenteriae)產(chǎn)生的一種重要的致病毒力因子，由具有酶活性的A亞基和結(jié)合作用的B亞基兩部分構(gòu)成。志賀(氏)菌毒素的受體為鞘糖脂Gb3(globotriaosylceramide)，其廣泛存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜表面。志賀(氏)菌毒素經(jīng)過(guò)復(fù)雜的胞吞途徑進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部殺死細(xì)胞。志賀(氏)菌毒素與細(xì)胞表面的Gb3受體結(jié)合后，經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)運(yùn)方式進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，再由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)最

2、終到達(dá)細(xì)胞質(zhì)中。在細(xì)胞質(zhì)之中，志賀(氏)菌毒素的酶活部分使28S rRNA失活，從而抑制蛋白的合成。但是，目前的研究對(duì)于毒素在胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制還有很多不清楚的地方。 本論文旨在研究志賀(氏)菌毒素B亞基N端的作用，通過(guò)基因克隆的方法對(duì)B亞基N端進(jìn)行修飾，并對(duì)修飾后B亞基的胞內(nèi)運(yùn)輸進(jìn)行研究。 本論文首先以pGlyc-KDEL質(zhì)粒為模板擴(kuò)增出STxB的基因序列，并將其連接到帶有GST的pGEX-4T-1骨架載體上，構(gòu)建原核表達(dá)

3、載體GST-STxB-pGEX-4T-1，并在大腸桿菌DH5 α中通過(guò)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，然后利用谷胱苷肽Sepharose 4B凝膠親和層析對(duì)重組的蛋白進(jìn)行純化。純化的蛋白采用SDS-PAGE和Western blot進(jìn)行檢測(cè)，并且用高效液相Bio-silSEC 250凝膠柱對(duì)重組的蛋白進(jìn)行分析，以確定其多聚體結(jié)構(gòu)。 對(duì)重組純化后的GST-STxB蛋白進(jìn)行了胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)难芯俊Ｊ紫葘端修飾的蛋白GST-STxB和未做修飾的蛋白ST