左旋組氨酸對(duì)匹羅卡品致癇大鼠的抗癇作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：癲癇是一種慢性、反復(fù)性、突然發(fā)作性的大腦機(jī)能失調(diào)疾病。其特征為中樞神經(jīng)系統(tǒng)反復(fù)的、過(guò)度同步化的、異常的電化學(xué)活動(dòng)，其產(chǎn)生的機(jī)制尚未完全清楚。左旋組氨酸(L-histidine，L-His)為一雜環(huán)氨基酸，，它是組胺的前體物質(zhì)，組胺作為一種神經(jīng)調(diào)質(zhì)或神經(jīng)遞質(zhì)在許多中樞活動(dòng)中起著重要的調(diào)節(jié)作用，近年的研究發(fā)現(xiàn)腦內(nèi)組胺與癲癇密切相關(guān)。故本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察L-His對(duì)匹羅卡品(Pilocarpine,PLO)致癇大鼠模型腦電和行為改變的影響，

2、并進(jìn)一步動(dòng)態(tài)觀察其對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)肽Y(neuropeptide-Y，NPY)的表達(dá)以及對(duì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用，為深入研究癲癇的發(fā)病機(jī)制和尋找有效的治療途徑提供靶點(diǎn)。 方法：1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：本實(shí)驗(yàn)選用體重為240～260g的健康成年雄性SD大鼠。 2、動(dòng)物手術(shù)：將大鼠頭部固定于腦立體定位儀上，按照大鼠立體定位圖譜，分別在雙側(cè)額葉和頂葉安裝腦電記錄電極，記錄皮層的腦電圖(EEG)，參考電極設(shè)在枕骨中央部，術(shù)后休息5天，

3、然后進(jìn)行記錄。 3、腦電記錄：采用日本光電機(jī)對(duì)給藥后動(dòng)物連續(xù)描記2h，腦電觀察指標(biāo)為發(fā)作潛伏期、大發(fā)作潛伏期、大發(fā)作次數(shù)、癇波頻率及發(fā)作各階段的潛伏期。 4、病理切片：記錄完畢，動(dòng)物采用心臟灌注取腦，做石蠟切片進(jìn)行HE染色，進(jìn)行免疫組化染色，觀察NPY動(dòng)態(tài)表達(dá)情況，用原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)法(TUNEL)觀察干預(yù)前后神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的動(dòng)態(tài)變化。 5、統(tǒng)計(jì)方法：采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，按單因素方差分析(One-W

4、ayANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，同一區(qū)域不同組均數(shù)間行q檢驗(yàn)。 結(jié)果：1、藥物干預(yù)組各項(xiàng)腦電指標(biāo)與干預(yù)對(duì)照組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，藥物干預(yù)后的各階段潛伏期、癇波頻率及大發(fā)作次數(shù)均有顯著降低。 2、HE染色顯示：PLO組海馬各區(qū)神經(jīng)元顯著變性、死亡，細(xì)胞結(jié)構(gòu)瓦解。海馬CA3區(qū)最早最明顯，CA2和CA4病變輕，齒狀回(DG)無(wú)顯著神經(jīng)元缺失。膠質(zhì)細(xì)胞增生。DG的淺顆粒層和內(nèi)分子層開始出現(xiàn)MF發(fā)芽，并逐漸增加。而L-His組

5、海馬結(jié)構(gòu)變性較輕，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3、免疫組化染色顯示：PLO組各時(shí)間點(diǎn)海馬各區(qū)NPY陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)表達(dá)增多，明顯高于L-His干預(yù)組，存活3天后NPY陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在門區(qū)及齒狀回表達(dá)逐漸下降，但仍高于對(duì)照組。 4、海馬凋亡神經(jīng)元細(xì)胞計(jì)數(shù)：PLO致癇后1d凋亡細(xì)胞數(shù)達(dá)到高峰、之后逐漸下降，但其最低值仍高于L-His組。 結(jié)論：1、在PLO點(diǎn)燃癲癇模型中，L-His不僅可以延遲PLO點(diǎn)燃的形成，還可以抑制點(diǎn)燃后的癲癇發(fā)