STAT3在匹羅卡品致癇鼠星形膠質(zhì)細胞增生中的作用.pdf

1、目的：研究匹羅卡品致癇狀態(tài)下大鼠海馬內(nèi)活化的信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活因子3 (p-STAT3)表達規(guī)律及星形膠質(zhì)細胞增生的情況，探討STAT3信號轉(zhuǎn)導通路在癲癇時星形膠質(zhì)細胞增生中的作用。 方法：采用氯化鋰-匹羅卡品腹腔注射方法建立大鼠顳葉癲癇模型，腹腔注射STAT3特異性抑制劑 AG490建立干預組模型，對照組以生理鹽水代替匹羅卡品腹腔注射；免疫組織化學方法對照觀察阻滯JAK/STAT 通路前后大鼠海馬p-STAT3與膠質(zhì)原纖維酸性

2、蛋白(GFAP)陽性細胞表達的變化規(guī)律，并用雙重免疫熒光方法觀察p-STAT3與GFAP陽性細胞間的關系。 結(jié)果： 1．行為學觀察：生理鹽水對照組大鼠無任何癇性發(fā)作。PILO模型組有85.00％(34/40)的動物達Racine分級Ⅲ級以上發(fā)作；7.50％(3/40)的大鼠死亡；7.50％(3/40)的大鼠未達Ⅲ級發(fā)作；動物反復自發(fā)性發(fā)作(SRS)為4.52±1.49次/只。AG490干預組大鼠Ⅲ級以上發(fā)作的發(fā)生率為82

3、.50％(33/40)；死亡率為15.00％(6/40)；2.50％(3/40)的大鼠未達Ⅲ級發(fā)作；SRS僅為1.26±0.78次/只。 2．組織病理學觀察：對照組海馬各區(qū)神經(jīng)元無明顯變化。PILO模型組大鼠SE后3h，海馬門區(qū)、CA1、CA3區(qū)開始散在出現(xiàn)神經(jīng)元變性、壞死，細胞排列不整齊，少量神經(jīng)細胞脫失；至SE3d時，上述病理改變達到高峰，齒狀回顆粒細胞也開始出現(xiàn)變性；SE15d時，神經(jīng)元受損狀況漸恢復，細胞排列漸整齊。AG

4、490干預組與PILO模型組比較，各時間點神經(jīng)細胞損傷情況明顯減輕。 3．免疫組化結(jié)果：生理鹽水對照組中，p-STAT3 在大鼠腦組織呈胞漿淺染色，極少有胞核免疫陽性反應；而PILO模型組中，p-STAT3則主要在胞核表達，其陽性細胞數(shù)目在SE3h時即開始增多，以CA1、CA3和齒狀回門區(qū)為主，于SE3d時達到高峰，之后漸下降，至SE30d時仍比正常水平略高；AG490干預組各時間點p-STAT3胞核陽性表達均較PILO組明顯減

5、少。生理鹽水對照組GFAP陽性細胞數(shù)量很少，胞體小，突起少而細小；PILO模型組GFAP陽性細胞胞體截面積增大、突起及其分支增多，且其細胞數(shù)量變化規(guī)律與p-STAT3陽性細胞類似；AG490干預組各時間點的GFAP陽性表達均較PILO組明顯減弱。 4．雙重免疫熒光結(jié)果：GFAP陽性細胞胞漿呈綠色星狀，p-STAT3陽性細胞胞核呈紅色圓形或橢圓形，且可以發(fā)現(xiàn)p-STAT3陽性胞核位于GFAP陽性細胞胞漿中，提示STAT3的激活發(fā)生

6、于反應性增生的星形膠質(zhì)細胞內(nèi)。 結(jié)論：氯化鋰-匹羅卡品慢性癲癇模型能夠復制出與人類顳葉癲癇相似的行為學和病理學改變。海馬星形膠質(zhì)細胞增生在癲癇發(fā)作早期是對癇性發(fā)作和神經(jīng)元損傷的適應性反應，而晚期則可能促進癲癇的復發(fā)。STAT3信號通路在癲癇后海馬星形膠質(zhì)細胞內(nèi)被激活，提示其活化可能促進星形膠質(zhì)細胞的反應性增生。AG490可阻斷SLAT3的激活，同時影響癲癇大鼠行為學改變、病理學變化及星形膠質(zhì)細胞的增生，提示其對癲癇發(fā)作可能有抑制