鋰-匹羅卡品致癇大鼠腦組織中KIF17的表達(dá)情況.pdf

1、目的:
　　 癲癇是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，全球患病率約1％。大部分患者用現(xiàn)有的抗癲癇藥物能有效控制發(fā)作，但仍有20％～40％的癲癇患者治療效果差，不能有效控制，稱為難治性癲癇。顳葉癲癇作為最常見的難治性癲癇，其發(fā)病機(jī)制一直是癲癇研究的熱點(diǎn)。谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最重要的興奮性氨基酸，其受體N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)在癲癇尤其是顳葉癲癇的形成和發(fā)展起著非常重要的作用。驅(qū)動蛋白家族成員17(KIF17)是一種驅(qū)動蛋白，在成年

2、脊椎動物神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)廣泛，在神經(jīng)細(xì)胞中沿微管向細(xì)胞膜運(yùn)輸NMDA受體的亞基NR2B，但其是否參與了顳葉癲癇的苔蘚纖維出芽及突觸重建尚未得知。本實(shí)驗(yàn)通過制備鋰-匹羅卡品致癇大鼠模型，定量監(jiān)測癲癇發(fā)作后不同時相點(diǎn)KIF17蛋白在海馬和顳葉皮質(zhì)表達(dá)的動態(tài)變化過程，探討其在顳葉癲癇中的作用，為臨床治療難治性癲癇提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 采用氯化鋰-匹羅卡品誘導(dǎo)癲癇大鼠模型，49只雄性健康Wistar大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表

3、法分成實(shí)驗(yàn)組(n=42)和對照組(n=7)，實(shí)驗(yàn)組又分為6個亞組包括癲癇后24h、72h、7d、14d、1個月，2個月(n=7)。運(yùn)用蛋白質(zhì)印記法檢測KIF17在致癇大鼠海馬和顳葉皮質(zhì)的表達(dá)變化，免疫熒光雙標(biāo)染色法確定KIF17的表達(dá)部位。
　　 結(jié)果:
　　 1.行為學(xué)觀察:氯化鋰-匹羅卡品致癇動物模型行為學(xué)改變分為急性期、靜止期和慢性期。大鼠在匹羅卡品注射后30min可出現(xiàn)行為學(xué)改變，包括:流涎、咀嚼、點(diǎn)頭、前肢抽搐

4、、跌倒等。大鼠的癲癇發(fā)作等級可按照Racine標(biāo)準(zhǔn)判斷，僅Ⅳ級及以上發(fā)作可用于實(shí)驗(yàn)。
　　 2.蛋白質(zhì)印跡:蛋白質(zhì)印記法在大鼠海馬中KIF17與β-action的積分光密度比值實(shí)驗(yàn)組分別為:0.5160±0.1961、0.7418±0.3134、0.8876±0.3192、0.7696±0.2713、0.7422±0.2610、0.7144±0.2708，同對照組(0.4948±0.2025)相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為:

5、7.051、4.974、7.419、8.795、8.264、6.676，均P＜0.05)。在大鼠顳葉皮質(zhì)中KIF17與β-action的積分光密度比值實(shí)驗(yàn)組分別為:0.4165±0.1599、0.4736±0.1708、0.6365±0.2694、0.6247±0.2221、0.7997±0.3527、0.6523±0.2845，同對照組(0.3447±0.1441)相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為:5.722、9.016、4.872

6、、7.808、4.791、4.846，均P＜0.05)。KIF17蛋白表達(dá)在大鼠海馬中實(shí)驗(yàn)組與對照組相比均增高，7d時最高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在顳葉皮質(zhì)中實(shí)驗(yàn)組與對照組相比均增高，30d時最高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3.免疫熒光:為進(jìn)一步探討KIF17的細(xì)胞定位，將KIF17抗體分別和微管相關(guān)蛋白2(MAP2)抗體、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)抗體、囊泡谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體1(BNP(I))抗體、

7、谷氨酸脫羧酶1(GAD67)抗體進(jìn)行熒光雙標(biāo)。免疫熒光雙標(biāo)染色法顯示KIF17蛋白主要存在于神經(jīng)元，包括興奮性神經(jīng)元和抑制性神經(jīng)元，而在星形膠質(zhì)細(xì)胞中不表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 1.KIF17在氯化鋰-匹羅卡品誘導(dǎo)的慢性癲癇大鼠海馬和顳葉皮質(zhì)的表達(dá)量均增高。
　　 2.KIF17蛋白主要存在于神經(jīng)元內(nèi)，包括興奮性神經(jīng)元和抑制性神經(jīng)元，在星形膠質(zhì)細(xì)胞中不表達(dá)。
　　 3.KIF17在難治性癲癇的發(fā)生發(fā)展中