化痰益氣法對匹羅卡品致癇鼠星形膠質(zhì)細胞的影響.pdf

1、目的: 提出有關(guān)癲癇病因病機的新認識，以確立新的治療方法。通過觀察化痰益氣法對匹羅卡品致病大鼠的抗癇作用以及對致癇大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的綜合調(diào)節(jié)作用。探究癲癇的發(fā)病機制以及化痰益氣法實驗藥物(化痰1號方)可能的抑癇機理，為新藥開發(fā)奠定基礎(chǔ)，為臨床治療提供理論依據(jù)。 方法: 參考癲癇古今相關(guān)文獻進行總結(jié)。采用氯化鋰—匹羅卡品腹腔注射方法建立大鼠顳葉癲癇模型，腹腔注射前各組均選用灌胃法給予相應藥物灌胃。連續(xù)灌胃7天后，

2、建立PILO組模型和化痰1號干預組模型，對照組以生理鹽水代替匹羅卡品腹腔注射；免疫組織化學方法對照觀察大鼠海馬內(nèi)腫瘤壞死因子—α(TNF—α)及膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)陽性細胞表達的變化規(guī)律。觀察化痰益氣法實驗藥物對海馬神經(jīng)元凋亡的影響以及腦保護作用。實驗研究包括兩部分；通過測定化痰1號對致癇大鼠行為學改變、發(fā)作潛伏期、持續(xù)時間，探討化痰1號的抗癇作用以及改善致癇大鼠行為學等機制；探討化痰1號對匹羅卡品致癇大鼠海馬腫瘤壞死因子—α

3、與膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)陽性細胞的影響。 結(jié)果: 1．行為學觀察：生理鹽水對照組大鼠無任何癇性發(fā)作。PILO模型組有80.00％(24/30)的動物達Racine分級Ⅲ級以上發(fā)作；10.00％(3/30)10.00的大鼠死亡；10.00％(3/30)的大鼠未達Ⅲ級發(fā)作；動物自發(fā)性發(fā)作(SRMS)為4.51±1.48次/只。化痰1號干預組大鼠Ⅲ級以上發(fā)作的發(fā)生率為76.70％(23/30)；死亡率為6.67％(2/

4、30)；16.67％(5/30)的大鼠未達Ⅲ級發(fā)作；SRMS僅為2.81±1.23次/只。 2．組織病理學觀察：對照組海馬各區(qū)神經(jīng)元無明顯變化。PILO模型組大鼠癲癇發(fā)作3h(SE3h)，海馬門區(qū)、CA1、CA3區(qū)開始散在出現(xiàn)神經(jīng)元變性、壞死，細胞排列不整齊，少量神經(jīng)細胞脫失；至SE3d時，上述病理改變達到高峰，齒狀回顆粒細胞也開始出現(xiàn)變性；SE14d時，神經(jīng)元受損狀況漸恢復，細胞排列漸整齊?；?號干預組與PILO模型組比較，

5、各時間點神經(jīng)細胞損傷情況明顯減輕。 3．免疫組化結(jié)果：生理鹽水對照組中，TNF—α在大鼠腦組織呈胞漿淺染色，極少有胞核免疫陽性反應；而PILO模型組中，TNF—α免疫陽性產(chǎn)物則主要在胞漿中，呈綜黃色顆粒表達，其陽性細胞數(shù)目在SE3h時即開始增多，以CA1、CA3和齒狀回門區(qū)為主，于SE3d時達到高峰，之后漸下降，至SE28d時仍比正常水平略高；化痰1號干預組各時間點TNF—α胞漿陽性表達均較PILO組明顯減少。生理鹽水對照組GF

6、AP陽性細胞數(shù)量很少，胞體小，突起少而細??；PILO模型組GFAP陽性細胞胞體截面積增大、突起及其分支增多，且其細胞數(shù)量變化規(guī)律與TNF—α陽性細胞類似化；化痰1號干預組各時間點的GFAP陽性表達均較PILO組明顯減弱。 結(jié)論: 氯化鋰—匹羅卡品慢性癲癇模型能夠復制出與人類顳葉癲癇相似的行為學和病理學改變。海馬星形膠質(zhì)細胞增生在癲癇發(fā)作早期是對癇性發(fā)作和神經(jīng)元損傷的適應性反應，而晚期則可能促進癲癇的復發(fā)?；?號可抑制海