TRAF1基因干擾對伴Hp感染的GEs-1細(xì)胞凋亡和遷移功能的影響.pdf

1、研究背景與目的:本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)正常胃粘膜上皮細(xì)胞株GES-1與胃癌組織來源的Hp共培養(yǎng)后可發(fā)生TRAF1基因上調(diào)的現(xiàn)象，并且干擾胃癌細(xì)胞株中TRAF1的表達(dá)可使細(xì)胞生長活力減弱，凋亡明顯增加。本課題擬通過TRAF1基因干擾伴Hp感染的GES-1細(xì)胞模型，了解TRAF1在Hp相關(guān)胃癌發(fā)生發(fā)展中可能的作用。
　　方法:在前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，選擇對GES-1細(xì)胞增殖影響最顯著的Hp菌株（2號菌株），與GES-1細(xì)胞共培養(yǎng)24小時，通過

2、熒光定量PCR和Western-bolt兩種方法驗(yàn)證TRAF1的表達(dá)情況。同時用Lipofectamine2000脂質(zhì)體將TRAF1 shRNA表達(dá)載體pLVX-shRNA2-TRAF1-shRNA2轉(zhuǎn)染至伴Hp感染的GES-1細(xì)胞中，再應(yīng)用熒光定量PCR和Western-bolt來檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中TRAF1的表達(dá)變化，驗(yàn)證干擾效果。經(jīng)檢驗(yàn)確定TRAF1被成功干擾后，通過MTT法、流式細(xì)胞技術(shù)檢測TRAF1對伴Hp感染的GES-1細(xì)胞增

3、殖活力和凋亡的影響，通過Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)來檢測TRAF1對伴Hp感染的GES-1細(xì)胞遷移能力的影響。
　　結(jié)果:1.2號Hp菌株與GES-1細(xì)胞共培養(yǎng)后，TRAF1的表達(dá)明顯上調(diào);pLVX-shRNA2-TRAF1-shRNA2對共培養(yǎng)細(xì)胞中TRAF1基因的表達(dá)具有明顯干擾效果。
　　2.干擾伴Hp感染的GES-1細(xì)胞中的TRAF1可減弱細(xì)胞生長活力，增加其凋亡。
　　3.干擾伴Hp感染的GES-1