2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、背景:
  急性胃粘膜損傷(AGML)是臨床上常見(jiàn)的圍術(shù)期并發(fā)癥,其具體的發(fā)病機(jī)制至今仍未完全明確。目前普遍認(rèn)為胃粘膜缺血是AGML發(fā)病的主要環(huán)節(jié)。課題組前期已通過(guò)大鼠的浸水束縛應(yīng)激模型,分別從損傷性應(yīng)激和非損傷的心理應(yīng)激等層面探討了AGML的發(fā)病進(jìn)程。然而卻一直未從缺血的角度探討AGML的發(fā)生機(jī)制及可能的防護(hù)措施。烏司他丁(UTI)作為一種廣譜尿胰蛋白酶抑制劑,具有減少氧自由基、穩(wěn)定溶酶體膜、減輕炎癥、改善循環(huán)等作用。研究表明U

2、TI對(duì)危重患者腸粘膜具有保護(hù)作用,但其對(duì)胃粘膜是否也有保護(hù)作用尚無(wú)報(bào)道。
  目的:
  本研究采用人胃粘膜上皮細(xì)胞株(GES-1),運(yùn)用氧糖剝奪(OGD)方法來(lái)構(gòu)建細(xì)胞的缺氧缺糖模型,單純從“缺血”角度研究胃粘膜損傷的機(jī)制,并觀察UTI預(yù)處理是否對(duì)損傷的細(xì)胞有保護(hù)作用。
  方法:
  1.構(gòu)建GES-1細(xì)胞株的OGD模型:采用無(wú)糖培養(yǎng)基和三氣培養(yǎng)箱對(duì)GES-1細(xì)胞給予不同的OGD時(shí)間(0、2、4、6、8h),

3、用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力,Hoechst染色法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡,免疫印跡法檢測(cè)Bcl-2,Bax蛋白的表達(dá);
  2.摸索UTI合適的作用濃度:將GES-1細(xì)胞按順序分別加入濃度為0、100、200、400、800、1000U/mL的UTI,作用12h后進(jìn)行CCK-8法檢測(cè),發(fā)現(xiàn)1000U/ml組細(xì)胞存活率較0U/ml組明顯下降(P<0.01),而其余組細(xì)胞存活率無(wú)明顯變化。故在OGD損傷6h前,去掉1000U/ml濃度

4、組,將細(xì)胞隨機(jī)分為正常對(duì)照組、氧糖剝奪組、不同濃度UTI預(yù)處理組(UTI濃度分別為100、200、400、800U/mL),處理后用CCK-8法檢測(cè);
  3.探索UTI減輕GES-1細(xì)胞OGD損傷的機(jī)制:GES-1細(xì)胞隨機(jī)分為正常對(duì)照組(N組)、氧糖剝奪組(O組)、UTI預(yù)處理組(U組)。N組不做任何處理,O組和U組細(xì)胞均進(jìn)行OGD處理6h,且U組細(xì)胞在OGD前先用800U/mlUTI提前作用12h。處理后,用CCK-8法測(cè)定細(xì)

5、胞活力,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡,免疫印跡法檢測(cè)Caspase-3和Cleaved Caspase-3的蛋白表達(dá)水平,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TRPV1mRNA的表達(dá)水平。
  結(jié)果:
  1.檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著OGD時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞活力明顯下降,凋亡細(xì)胞明顯增多,凋亡率顯著上升,凋亡相關(guān)蛋白Bax/Bcl-2比值逐漸增加(P<0.01或P<0.05)。
  2.與氧糖剝奪組比較,細(xì)胞存活率在UTI濃度提高到400

6、U/ml和800U/ml時(shí)明顯增加,且在UTI濃度為800U/ml時(shí)細(xì)胞存活率最高(P<0.01)。
  3.結(jié)果顯示,與N組比較,O組細(xì)胞存活率顯著降低,凋亡率增加,Caspase-3和Cleaved Caspase-3表達(dá)增加,TRPV1mRNA表達(dá)降低(P<0.05);而UTI預(yù)處理能顯著抑制上述O組的變化,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  結(jié)論:
  利用無(wú)糖培養(yǎng)基和三氣培養(yǎng)箱可成功構(gòu)建GES-1細(xì)胞的OGD模型,能較

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