RNA干擾Notch1基因表達(dá)對(duì)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞增殖、凋亡及Akt信號(hào)通路的影響.pdf

1、【目的】觀察Notch1、VEGF、MVD與腎透明細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系。研究干擾沉默Notch1基因后,腎透明細(xì)胞癌786-0細(xì)胞株增殖、凋亡的變化及Akt信號(hào)通路的改變。
　　【方法】(1)免疫組化S-P法檢測(cè)52例腎透明細(xì)胞癌Notch1、VEGF、MVD的表達(dá)水平,癌旁腎組織及30例正常腎組織為對(duì)照。
　　(2)構(gòu)建Notch1基因的小干擾RNA片段,經(jīng)Lipofectamine TM 2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染786-0

2、細(xì)胞,RT-PCR的方法鑒定干擾效果。
　　(3)應(yīng)用MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,觀察RNA干擾沉默Notch1基因后腎透明細(xì)胞癌786-0細(xì)胞增殖的變化;TUNEL法分析細(xì)胞的凋亡。
　　(4)Western Blot檢測(cè)干擾沉默Notch1基因后Notch1蛋白、凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Pro-caspase3和Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白T-Akt、p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表達(dá)。
　　【結(jié)果】(1)N

3、otch1、VEGF在腎透明細(xì)胞癌表達(dá)陽(yáng)性率分別為82.69％、92.30%,顯著高于癌旁腎組織(42.55%,40.42%)及正常腎組織(16.67%,20.00%),P<0.01。腎透明細(xì)胞癌MVD為(64.24±12.35),顯著高于癌旁腎組織(32.48±11.74)及正常腎組織(20.37±10.82),P<0.01。Notch1、VEGF、MVD均與腎癌細(xì)胞Fuhrman分級(jí)、腫瘤大小及TNM分期相關(guān),且Notch1與MVD

4、、VEGF與MVD之間呈正性相關(guān)。
　　(2)Notch1 siRNA可以下調(diào)Notch1 mRNA和Notch1蛋白的表達(dá)。
　　(3)干擾沉默Notch1基因后腎透明細(xì)胞癌786-0細(xì)胞增殖受到抑制,細(xì)胞凋亡率增加。Notch1 siRNA能下調(diào)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Pro-caspase3的表達(dá)。
　　(4)干擾沉默Notch1基因能下調(diào)腎透明細(xì)胞癌786-0細(xì)胞p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表達(dá)

5、,但T-Akt水平未見(jiàn)明顯改變。
　　【結(jié)論】Notch1、VEGF、MVD在腎透明細(xì)胞癌中有異常高表達(dá),Notch1與VEGF可能共同參與調(diào)控腫瘤新生血管的形成。Notch1、VEGF、MVD可能與腎透明細(xì)胞癌的預(yù)后有關(guān)。干擾沉默Notch1基因可以下調(diào)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Pro-caspase3的表達(dá),抑制786-0細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;沉默Notch1基因可通過(guò)抑制Akt通路的磷酸化下調(diào)該信號(hào)通路的活性,提示Notch