超高壓處理對水產(chǎn)品源副溶血性弧菌及其耐壓菌株的影響.pdf

1、本文以自行分離的水產(chǎn)品源副溶血性弧菌為研究對象，通過超高壓處理分離得到的副溶血性弧菌D（V.parahaemolyticusD）和其經(jīng)超高壓馴化后的副溶血性弧菌NYD（V.parahaemolyticus NYD），測定兩株菌菌株細胞膜通透性、細胞膜Na+K+-ATP酶活性、細胞超微結(jié)構(gòu)和細胞內(nèi)過氧化氫酶活性變化研究兩菌株在壓力下細胞結(jié)構(gòu)和生物學特性的變化;菌液離心后上清液中核酸物質(zhì)和蛋白質(zhì)泄漏量測定、細菌細胞內(nèi)可溶性活性蛋白含量和總巰

2、基含量測定以及胞內(nèi)蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析研究超高壓處理對菌株細胞活性蛋白質(zhì)圖譜的影響;超速離心法提取菌體外膜蛋白，經(jīng)SDS-PAGE分離后，質(zhì)譜法鑒定差異蛋白，并初步建立雙向電泳技術來進一步分離所提取的外膜蛋白。研究結(jié)果具體如下:
　　從48份海產(chǎn)品中共檢出14株V.parahaemolyticus，檢出率為29.2％，14株V.parahaemolyticus溶血活性均為陰性，tlh基因均為陽性，tdh和

3、trh基因均為陰性。
　　250 MPa，10 min的處理條件可以完全滅活V.parahaemolyticus D和NYD，通過掃描電鏡可以觀察到兩菌株細胞結(jié)構(gòu)嚴重變化。隨處理的壓力的升高，副溶血性弧菌菌株D與菌株NYD的細胞膜上Na+/K+-ATP酶活性明顯下降、細胞膜損傷率逐漸上升、菌株胞內(nèi)CAT酶活性先增加再逐漸降低。但在各個壓力處理條件下，菌株NYD的Na+/K+-ATP酶活都高于菌株D，說明菌株NYD的壓力耐受性較強。

4、
　　250 MPa壓力處理10 min后，菌液離心上清液中核酸物質(zhì)和蛋白質(zhì)泄漏量達到最大。隨著處理壓力的增加，兩株菌胞內(nèi)分離得到的蛋白質(zhì)的蛋白含量和總巰基含量下降。SDS-PAGE分析結(jié)果表明超高壓處理對兩株菌胞內(nèi)蛋白分子量為140-180 kDa的條帶影響最大。超高壓處理可破壞副溶血性弧菌細胞內(nèi)蛋白質(zhì)造成蛋白變性從而導致細胞死亡。
　　SDS-PAGE電泳結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術，結(jié)果表明菌株NYD與D外膜蛋白差異蛋白鑒定為配體

5、門控通道蛋白(ligand-gated channel)和TonB依賴受體蛋白(TonB-dependent receptor)，具有結(jié)合鐵離子、運輸和受體活性。100，150 MPa壓力處理15 min后，兩菌株外膜蛋白圖譜中新表達的蛋白質(zhì)鑒定有外膜通道道白TolC(outer membranechannel protein Tol C)、檸檬酸合成酶(citrate(Si)-synthase)、鉀離子轉(zhuǎn)運蛋白TrkA(potassi