水產(chǎn)品源創(chuàng)傷弧菌的毒性及超高壓處理對其細胞超微結(jié)構(gòu)和毒性的影響.pdf

1、本文通過溶血實驗和小鼠急性毒性實驗，評價市售水產(chǎn)品中創(chuàng)傷弧菌和創(chuàng)傷弧菌CICC21615菌株(V.vulnificus CICC21615)毒性大小。從市售水產(chǎn)品中分離獲得的6株疑似創(chuàng)傷弧菌菌株經(jīng)生化鑒定和溶細胞素基因擴增、基因測序后證實除2號分離菌株基因測序未測出外，其它5株確定為創(chuàng)傷弧菌。V.vulnificus CICC21615擴增出400 bp左右的基因條帶，而6株分離株均擴增出222 bp左右的典型創(chuàng)傷弧菌溶細胞素基因條帶。

2、在溶血實驗中，V.vulnificus CICC21615的溶血圈與菌落直徑之比達到3.0，1-6號分離株分別為2.3、2.0、2.8、2.0、2.5和2.1。在小鼠急性毒性實驗中，V.vulnificus CICC21615的半致死量(LD50)是3.776×107CFU/mL;而3號分離株的LD50為2.218×108CFU/mL。結(jié)果表明V.vulnificus CICC21615菌株毒性較3號分離株略強;3號菌株命名為V.vul

3、nificus cd03。
　　研究了市售水產(chǎn)品中分離獲得的V.vulnificus cd03與V.vulnificusCICC21615毒性大小和小鼠臟器毒性反應差異。兩菌株分別稀釋到106 CFU/mL、107 CFU/mL和108 CFU/mL，按照0.02 mL菌液/g體重給小鼠腹腔注射。小鼠腹腔注射24 h后，V.vulnificus CICC21615與V.vulnificus cd03108 CFU/mL劑量組肝臟系

4、數(shù)分別達到了7.30％和7.27％，分別高于同菌株107 CFU/mL、106 CFU/mL劑量組和對照組，差異顯著。兩株創(chuàng)傷弧菌108 CFU/mL劑量組的小鼠肝臟細胞空泡變性明顯，內(nèi)部結(jié)構(gòu)被破壞，細胞膜破裂。脾臟組織在108 CFU/mL劑量組中細胞間隙增大，出現(xiàn)大量白色斑點，脾臟組織疏松明顯。V.vulnificus CICC21615與V.vulnificus cd03108 CFU/mL劑量組谷草(GOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT

5、)酶活增加量、谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶(GST)酶活減少量分別最高達到16.62與11.62、5.77與5.6、46.25與37.29，差異顯著，所有劑量組丙二醛(MDA)含量變化不顯著。感染小鼠體內(nèi)，創(chuàng)傷弧菌主要分布在肝臟和脾臟，少量分布在腎臟，血液中未分離出單菌落。試驗結(jié)果表明，V.vulnificus CICC21615的臟器毒性要強于V.vulnificus cd03。菌液對小鼠肝臟和脾臟的損傷程度隨著菌液濃度的增加而加重，并且高濃度

6、的菌液既能加速小鼠肝臟組織的損傷程度，同時也提高了細胞自身修復的速度，可能原因在于激活并加快了細胞內(nèi)部相關(guān)損傷修復反應。
　　本文通過超高壓處理實驗，研究了超高壓對水產(chǎn)品中創(chuàng)傷弧菌細胞超微結(jié)構(gòu)與毒性的影響。創(chuàng)傷弧菌標準菌株(V.vulnificusulnificusCICC21615)和分離自水產(chǎn)品中的創(chuàng)傷弧菌（V.vulnificusulnificus Cd03)經(jīng)100、150、200、250、300 MPa壓力處理進行菌存活

7、數(shù)計數(shù)、透射電鏡觀察、260 nm與280nm紫外吸收物測定、溶血試驗和小鼠急性毒性實驗，未處理組作為對照組。V.vulnificusulnificus CICC21615在200 MPa壓力處理下，只存活5個，致死率接近100％，250 MPa及以上致死率100％，V.vulnificusulnificus Cd03在200 MPa及以上壓力處理致死率為100％。對照組的創(chuàng)傷弧菌細胞壁結(jié)構(gòu)完整，胞漿分布均勻有序。隨著壓力的升高，細胞壁

8、皺縮明顯，同時細胞膜有明顯的損傷且局部破裂，內(nèi)含物泄漏、出現(xiàn)較大面積的透電子區(qū)。200 MPa及以上壓力處理的菌株，細胞膜消失，細胞擬核聚合，細菌細胞蛋白凝聚。在260 nm紫外吸收中，V.vulnificusulnificus CICC21615和V.vulnificusulnificus Cd03分別在250 MPa和200MPa達到最高點，分別達到0.105和0.119;而在280nm紫外吸收中，V.vulnificusulnif

9、icusCICC21615和V.vulnificusulnificus Cd03均在250MPa達到最高點，分別達到0.106和0.187。隨著壓力的升高，V.vulnificusulnificus CICC21615和V.vulnificusulnificus Cd03的溶血活性和急性毒性不斷減小，兩者溶血活性在200MPa及以上降為0，兩者急性毒性在150MPa及其以上均對小鼠無致死作用。V.vulnificusulnificus