副溶血性弧菌耐高壓菌株耐壓機制的研究.pdf

1、本文以水產(chǎn)品中常見的致病菌—副溶血性弧菌為研究對象，通過超高壓處理篩選獲得副溶血性弧菌耐高壓菌株，探究微生物耐超高壓脅迫的機制。首先篩選分離耐超高壓脅迫的副溶血弧菌菌株，研究細(xì)菌細(xì)胞膜組成成分及細(xì)胞中成分在高壓脅迫下的應(yīng)激機制，從而為微生物耐高壓脅迫機理的研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。具體結(jié)論如下:
　　 研究了副溶血性弧菌對超高壓處理的耐受能力，發(fā)現(xiàn)經(jīng)250MPa及以上的壓力處理，副溶血性弧菌的致死率可達(dá)100％。利用80～250MPa超

2、高壓反復(fù)處理后分離得到的耐壓菌株經(jīng)250MPa壓力脅迫處理，存活量較原始菌株提高了3個數(shù)量級。篩選分離獲得了耐超高壓脅迫的副溶血弧菌，并對耐壓菌株和原始菌株細(xì)胞膜通透性、細(xì)胞膜可溶性蛋白、Na+K+ATP酶活性、細(xì)胞無機鹽離子含量的差異進(jìn)行測定。耐壓菌株細(xì)胞膜通透性與原始菌株無顯著差異，細(xì)胞膜可溶性蛋白在分子量為36KDa附近濃度明顯增大。耐壓菌株Na+K+ATP酶活性大大提高。耐壓菌株細(xì)胞鉀、鈉、鈣、鎂離子的含量均比原始菌株的低，但鋅

3、離子含量比原始菌株高。經(jīng)過相同的壓力處理，耐壓菌株胞內(nèi)抗氧化相關(guān)酶的相對酶活降低幅度較小，而原始菌株降低幅度較大。
　　 通過GC-MS方法分析耐壓菌株與原始菌株細(xì)胞膜脂肪酸的組成，結(jié)果顯示耐壓菌株不飽和脂肪酸與飽和脂肪酸的比例(USFA/SFA)增大，不飽和脂肪酸的流動性強，利于細(xì)胞處于高壓環(huán)境中細(xì)胞的形變，維持細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完整。通過實時熒光定量PCR研究基因表達(dá)的差異，揭示耐壓菌株耐超高壓脅迫的內(nèi)在機制，qRT-PCR結(jié)果顯示