EIF4G1對非小細(xì)胞肺癌生物學(xué)功能影響的研究.pdf

1、目的:肺癌是世界上許多國家最常見的惡性腫瘤之一，在我國，肺癌居惡性腫瘤死因首位。肺癌可分為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)兩大類，其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌病例的80％～85％，其中只有15-25％的非小細(xì)胞肺癌有手術(shù)治療的機會，而即使接受根治性手術(shù)治療，仍然有50％的NSCLC患者會復(fù)發(fā)，而隨著近幾年轉(zhuǎn)化

2、醫(yī)學(xué)的研究推進(jìn)，研究了一些腫瘤檢測方法和靶點，開發(fā)出了一些靶向性藥物。EIF4G1（eukaryotic translation initiation factor4 gamma1，真核翻譯起始因子4G1）最初發(fā)現(xiàn)是作為翻譯起始因子復(fù)合物EIF4F的組成蛋白之一。該復(fù)合物最重要的功能是將mRNA募集到核糖體上，這是蛋白質(zhì)合成起始步驟。在蛋白質(zhì)翻譯這一生理過程中，EIF4G1作為一個支架蛋白，使其它與翻譯起始有關(guān)的因子與之結(jié)合而發(fā)揮各自的

3、作用。近年來的研究表明，EIF4G1除了促進(jìn)蛋白翻譯外，也與腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)。大量研究表明，EIF4G1在鼻咽癌，乳腺癌，鱗狀細(xì)胞癌中均有高表達(dá)。有報導(dǎo)顯示EIF4G1位于染色體3q27上，該區(qū)域在50％的肺癌中被檢測到有非正常的擴增，EIF4G1可能是一種檢測NSCLC的潛在分子標(biāo)記物，至今為止，沒有研究顯示NSCLC中過量表達(dá)得EIF4G1與NSCLC細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，也未見EIF4G1是否參與NSCLC發(fā)生及發(fā)展過程

4、的研究報道。本文采用RNAi技術(shù)，高效特異性的干擾EIF4G1在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)，建立穩(wěn)定表達(dá)EIF4G1-shRNA的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株，研究EIF4G1對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株生物學(xué)功能的影響，為非小細(xì)胞肺癌的治療提供新的思路。
　　方法:(1)應(yīng)用Westernblot技術(shù)，分別檢測EIF4G1在正常肺上皮細(xì)胞株16HBE與NSCLC細(xì)胞株、非小細(xì)胞肺癌病人癌旁組織與癌組織中的表達(dá)情況。確認(rèn)EIF4G1與NSCLC發(fā)生

5、的正相關(guān)關(guān)系。(2)利用RNAi技術(shù)，干擾EIF4G1在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中的表達(dá)，通過cck8、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞克隆、thanswell和劃痕等一系列體外實驗，探討EIF4G1對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖、凋亡、周期、遷移、侵襲等生物學(xué)功能的影響。(3)利用共聚焦顯微鏡與免疫共沉淀技術(shù)，檢測EIF4G1與USP10相互作用及其對非小細(xì)胞肺癌功能的影響。
　　結(jié)果:(1)通過免疫印跡方法，檢測出EIF4G1分別在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株與組織

6、中的表達(dá)要高于正常肺上皮細(xì)胞株與癌旁組織。(2)在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中通過敲低EIF4G1，可以發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的生長、增殖、遷移、侵襲與對照細(xì)胞相比受到了明顯的抑制，通過流式細(xì)胞技術(shù)，觀察到敲低EIF4G1后，促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡及產(chǎn)生了GOG1期的阻滯。(3)通過免疫共沉淀技術(shù)，驗證了EIF4G1與USP10（Ubiquitin-specific protease10，泛素化特異性蛋白酶10）的相互作用，并通過共聚焦顯微鏡對這兩個蛋白進(jìn)行共定位

7、，EIF4G1與USP10共定位在細(xì)胞質(zhì)。(4)通過慢病毒包裝系統(tǒng)構(gòu)建同時敲低USP10與EIF4G1的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，與對照細(xì)胞（只敲低EIF4G1基因）相比，USP10負(fù)調(diào)控EIF4G1介導(dǎo)的的細(xì)胞生長、增殖、遷移、侵襲、凋亡等生物學(xué)功能的影響。
　　結(jié)論:通過免疫印跡的方法，證實了EIF4G1在非小細(xì)胞肺癌中過表達(dá)，通過RNAi技術(shù)，確定了EIF4G1對非小細(xì)胞肺癌生物學(xué)功能的影響。通過免疫共沉淀驗證了EIF4G1與USP10的