非小細(xì)胞肺癌患者DAPK基因甲基化研究與去甲基化對肺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：探討在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者的血漿中死亡相關(guān)蛋白激酶(DAPK)基因啟動(dòng)子區(qū)異常甲基化檢測的臨床意義,以及去甲基化藥物5-Aza-CdR對DAPK基因甲基化產(chǎn)生的影響。
　　方法：在第一部分實(shí)驗(yàn)中,我們用巢式甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(nMSP)檢測了112例NSCLC患者肺癌組織、癌旁組織、外周血血漿和112例正常對照組血漿樣品中DAPK基因的甲基化情況,并比較各組的檢測結(jié)果。在第二部分實(shí)驗(yàn)中,我們用不同濃度及作用時(shí)

2、間的5-Aza-CdR處理了體外培養(yǎng)的A549細(xì)胞,MTT法檢測5-Aza-CdR對細(xì)胞增殖的抑制率,Cellscratchtest法觀察5-Aza-CdR對A549細(xì)胞遷移能力的影響,MSP及逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測用藥前后A549細(xì)胞中DPAK基因甲基化狀態(tài)及其mRNA表達(dá)情況的變化。
　　結(jié)果：癌組織DAPK基因甲基化率為59.8％,高于癌旁組織的8.0%(P<0.001),其中鱗癌、腺癌和腺鱗癌癌組織和癌旁組織間的

3、甲基化檢出率比較均有顯著性差異(P<0.001);患者血漿中DAPK基因甲基化檢測率為21.4%,對照組血漿未檢測到DAPK基因甲基化(P<0.001);血漿中DAPK基因甲基化檢出率與NSCLC臨床分類、臨床分期和病理類型無明顯相關(guān)性。在1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8mol/L的5-Aza-CdR處理人腺肺癌A549細(xì)胞24、48、72、96、120小時(shí)后,細(xì)胞增殖均受到不同程度的抑制,有時(shí)間和劑量的依賴性;其

4、中1×10-5、1×10-6mol/L濃度組的5-Aza-CdR處理72小時(shí)后的A549細(xì)胞相比正常對照組A549細(xì)胞遷移能力有明顯下降;在5-Aza-CdR處理前未檢測到A549細(xì)胞中DAPK基因的mRNA表達(dá),經(jīng)過不同濃度5-Aza-CdR處理72小時(shí)后,DAPK基因在A549細(xì)胞中甲基化狀態(tài)呈現(xiàn)出了逆轉(zhuǎn),同時(shí)mRNA重新獲得表達(dá)。
　　結(jié)論：用nMSP法檢測血漿樣本中DAPK基因甲基化狀態(tài)可為臨床上非小細(xì)胞肺癌的篩查和診斷提