PD-L1在非小細胞肺癌中表達的生物學作用及臨床意義.pdf

1、隨著人類生存環(huán)境的惡化，惡性腫瘤成為世界上致死率最高的疾病之一，肺癌的發(fā)病率及致死率居所有惡性腫瘤之首。肺癌可以分為非小細胞肺癌(non small cell lung cancer，NSCLC)和小細胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)。其中NSCLC約占肺癌總數的80％-85%，NSCLC中的肺腺癌占比逐年升高。其病情發(fā)展迅速，轉移速度快，大部分病人發(fā)現時已發(fā)展至中晚期，手術機會少，術后復發(fā)率高，預后差，

2、晚期患者的5年生存率不足15%，肺腺癌已經成為了臨床治療的難點。目前化療和分子靶向治療均遇到了瓶頸，為了提升患者的治療效果和延長其生存時間，探求新的更為有用的治療方法有著非常重要的臨床意義。免疫卡控點抑制劑很有可能成為肺癌常規(guī)治療的重要組成部分，聯合靶向和免疫治療將是未來的一種新型治療模式。本研究試圖探討這兩種治療方法的目標靶點之間的聯系和相關性，為將來的聯合治療模式尋求治療依據和目標人群。
　　免疫卡控點(Immune chec

3、kpoints)的重要成員，如 B7家族負性協同刺激分子，PD-L1、B7-H3、B7-H4等，可異常表達于諸多人類腫瘤組織及腫瘤浸潤的免疫細胞中，參與腫瘤免疫逃逸并與患者的臨床病理參數及預后密切相關，是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分。它們一方面通過負性調控T細胞介導的抗腫瘤應答，另一方面通過調節(jié)腫瘤細胞自身的生物學行為，共同參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。研究表明，PD-L1可作為肺癌治療的重要免疫干預靶點。但是，截至目前，PD-L1在肺癌中異常表達

4、的臨床意義、生物學功能及作用機制亟待深入探討。本文首先通過RNAi技術、慢病毒感染、流式分選、細胞增殖、劃痕試驗、Transwell侵襲實驗、細胞周期及凋亡分析、T細胞殺傷實驗等系列研究，論證肺癌細胞株異常表達 PD-L1的生物學作用；其次，結合肺腺癌術后的臨床病例進行回顧性研究，探討肺腺癌患者EGFR及KARS突變情況、PD-L1及PD-1表達水平等重要生物學指標的相關性，以期了解肺腺癌免疫卡控點干預聯合靶向治療對患者預后的影響，為尋

5、求肺癌綜合治療模式奠定基礎。
　　本研究結果顯示：(1)免疫卡控點PD-L1在肺癌細胞株中高表達，我們通過RNAi技術、慢病毒感染、流式分選技術，在肺癌細胞系A549（腺癌），SK-MES-1（鱗癌）中成功構建了 PD-L1下調表達的模型；(2)細胞增殖、劃痕試驗、Transwell侵襲實驗、細胞周期及凋亡分析等研究結果表明，免疫卡控點分子 PD-L1在肺癌細胞系A549，SK-MES-1中下調表達后，均顯著抑制上述細胞系的增殖能

6、力、遷移能力、侵襲能力，并可導致細胞周期阻滯；(3)鑒于靶向治療在肺癌中的重要作用，我們同時檢測了免疫卡控點分子PD-L1在肺癌細胞系A549，SK-MES-1中下調表達后EGFR的基因表達水平，結果顯示PD-L1在A549，SK-MES-1中下調表達后，EGFR的基因表達水平顯著下調；(4)我們進一步收集100例肺腺癌患者手術后石蠟組織樣本，免疫組織化學檢測 PD-L1的表達水平，分析其臨床意義并回顧性分析其預后價值，結果表明PD-L

7、1低表達60例(60/100，60%)，PD-L1高表達40例(40/100，40%)，我們發(fā)現肺癌組織中 PD-L1表達水平與患者預后成顯著負相關(P=0.032)，與其它臨床病理參數無顯著相關性；(5)我們進一步運用實時熒光定量PCR技術對其EGFR基因突變情況檢測，結果表明PD-L1低表達患者中EGFR突變人數為42人(42/60，70%)；PD-L1高表達患者中EGFR突變人數為18人(18/40，45%)。PD-L1表達水平、

8、病理分期、EFGR突變狀態(tài)可以作為肺腺癌患者的一個獨立預后因素。(6)我們進一步通過免疫組織化學檢測100例肺癌患者中PD-1的表達水平，運用實時熒光定量PCR技術檢測其KRAS基因突變情況，結果表明，PD-1低表達47人(47/100，47%)，PD-1低表達患者中KRAS突變人數為8人(8/47，17%)；PD-1高表達53人(53/100，53%)，PD-1高表達患者中KRAS突變人數為2人(2/53，3.8%)，PD-1的表達與

9、KRAS突變呈負相關。
　　綜上所述，我們探討了免疫卡控點分子 PD-L1在肺癌中表達的生物學作用及臨床意義，證實了免疫卡控點分子PD-L1可以通過調控肺癌細胞的增殖、遷移、侵襲、轉移及細胞周期調控等途徑參與促進肺癌的發(fā)生與進展。同時，我們發(fā)現肺癌靶向治療的重要靶點EGFR基因的突變情況與PD-L1表達水平及患者預后密切相關。肺腺癌的靶向治療以及基于 PD-L1的免疫治療，將為未來肺腺癌綜合治療模式提供新思路和新策略，具有重要的臨